第一部分免疫共沉淀联合血红蛋白释放实验研究红细胞内血红蛋白的相互作用目的将红细胞血红蛋白电泳释放实验（Hemoglobin release test,HRT）与免疫共沉淀联用,寻找红细胞内与血红蛋白（Hemoglobin,Hb）相互作用的蛋白。方法首先,将正常成人新鲜抗凝全血制备成红细胞悬液和溶血液,通过血红蛋白电泳释放实验分别分离得到红细胞HbA（RA）、红细胞HbA₂（RA₂）,溶血液HbA（HA）和溶血液HbA₂（HA₂）。将此区带从凝胶中分别切出,经过反复冻融后,将上清吸出并进行浓缩,然后分别用hemoglobinβantibody通过免疫共沉淀的方法分别从红细胞裂解液、RA和HA中捕获血红蛋白相互作用的蛋白复合物,并用5%-12%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对此复合物进行分离,最后用Q-TOF MS对目的区带进行鉴定,并用IDQD模型对血红蛋白相互作用进行预测,之后利用免疫印迹对质谱和IDQD预测结果进行验证。结果经5%-12%SDS-PAGE分离,红细胞裂解液,RA和HA的免疫共沉淀复合物中主要包含16 k D、20 k D、22 k D、28 k D和50 k D五条明显的区带,经质谱鉴定可信度较高的蛋白为16 k D的血红蛋白和22 k D的硫氧还蛋白过氧化物酶2（peroxiredoxin2,Prx2）,IDQD模型预测HbA与Prx2之间存在相互作用,而HbA₂与Prx2之间不存在相互作用。通过免疫印迹证明在RA、HA和RA₂中确实有Prx 2存在,而在HA₂中没有检测到Prx2。结论在人红细胞内,Prx2与HbA之间存在相互作用,但与HbA₂之间没有相互作用。第二部分双向电泳联合血红蛋白释放实验研究血红蛋白相互作用目的将血红蛋白释放实验（Hemoglobin release test,HRT）和双向电泳联用,比较红细胞和溶血液血红蛋白释放实验中各血红蛋白（Hemoglobin,Hb）复合物中的差异蛋白,以寻找红细胞内与血红蛋白相互作用的蛋白。方法首先,将正常成人新鲜抗凝全血制备成红细胞悬液和溶血液,通过血红蛋白电泳释放实验分别分离得到红细胞和溶血液的HbA、HbA₂、HbA与HbA₂之间及再释放Hb的区带。将这些区带从凝胶中分别切出,经过反复冻融后,将上清吸出并进行浓缩,然后用双向电泳分离各区带血红蛋白复合物,并用Q-TOF质谱对双向电泳上的差异蛋白进行鉴定。结果红细胞悬液和溶血液中的HbA（RA/HA）、HbA₂（RA₂/HA₂）、HbA与HbA₂之间（RA-A₂/HA-A₂）及再释放Hb部分（RR/HR）分成A,B,C,D四组分别进行双向电泳。（1）凝胶图像扫描后将红细胞和溶血液相应的各Hb部分凝胶图像进行对比,红细胞各Hb部分的蛋白点均多于溶血液的相应部分,并可以找到明显的差异蛋白点:A组中发现12个差异蛋白点,B,C,D组中差异蛋白点数目依次为9个,9个,13个。（2）用Q-TOF质谱对红细胞和溶血液的HbA部分的蛋白点进行检测,二者的HbA部分中都有Prx2、热休克蛋白90（Hsp90）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、Actin、丙酮酸激酶、过氧化氢酶存在。但目前未找到差异蛋白。结论将溶血液和红细胞血红蛋白样本进行比较有差异蛋白点存在,但目前的方法未找到差异蛋白。