南昆山毛叶茶三种多酚的分离纯化及抗氧化、抗炎研究

来源 :华南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zmdwfh2008
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为探究南昆山毛叶茶活性成分的功能特性,本研究以南昆山毛叶绿茶为材料,通过30%乙醇/乙酸乙酯提取,采用羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱层析和制备型高效液相色谱分离纯化,得到3种多酚单体物质;通过高效液相色谱-串联质谱、核磁共振和红外光谱鉴定单体结构;采用DPPH、ABTS、FRAP和ORAC四种化学方法、CAA法及L-O2肝细胞氧化应激模型法,综合评价了3种多酚单体物质的抗氧化活性;运用小鼠巨噬细胞RAW264.7炎症模型,通过ELISA、RT-PCR和Western blot等技术方法,探讨了南昆山毛叶茶分离得到的多酚单体物质的抗炎活性及作用机制。本研究获得主要结果如下:1.南昆山毛叶绿茶多酚组分的分离纯化和结构鉴定以南昆山毛叶绿茶为实验材料,经30%乙醇浸提、乙酸乙酯萃取后,获得30%乙醇/乙酸乙酯提取物,分离纯化得到物质1、物质2、物质3,纯度分别为98%、96%、97%,得率分别为2.45%、0.55%、0.31%。通过高效液相色谱-串联质谱、核磁共振和红外光谱鉴定组分结构,鉴定物质1为没食子儿茶素没食子酸酯(GCG),物质2为1,2,4,6-四没食子酰葡萄糖(1,2,4,6-GA-glc),物质3为儿茶素-3,5-二没食子酸酯(GC-3,5-di GA),其中后2种为茶叶中的特殊多酚物质。2.多酚单体物质的抗氧化活性研究(1)DPPH、ABTS和FRAP三种化学法的抗氧化结果基本一致:GCG>GC-3,5-di GA>1,2,4,6-GA-glc,ORAC法的结果与此相反,1,2,4,6-GA-glc的作用强于GCG和GC-3,5-di GA,综合,GCG、1,2,4,6-GA-glc和GC-3,5-di GA具有化学抗氧化能力,其中GCG具有较强的清除自由基能力。(2)CAA法结果显示GCG、GC-3,5-di GA和1,2,4,6-GA-glc呈剂量依赖性抑制DCF生成;在H2O2诱导L-O2细胞氧化损伤模型中,GCG、GC-3,5-di GA和1,2,4,6-GA-glc均可显著提高细胞的存活率,降低细胞内ROS含量,抑制细胞上清中LDH的释放量。综合2种基于细胞水平上的抗氧化研究表明,这3种多酚单体物质具有良好的细胞抗氧化活性,其中1,2,4,6-GA-glc细胞抗氧化能力最强,GC-3,5-di GA次之,GCG最弱。3.多酚单体物质的抗炎活性研究(1)GCG和GC-3,5-di GA与1μg/m L的LPS混合孵育24 h后,均可显著抑制NO和PGE2生成。GCG和GC-3,5-di GA抑制NO生成的IC50值为92.37±10.04和58.17±3.90μg/m L,GC-3,5-di GA的抑制效果比GCG好。在100μg/m L浓度时,GCG和GC-3,5-di GA对PGE2生成的抑制率分别为38.75±5.42%和24.64±2.42%。(2)在25~100μg/m L浓度范围内,GCG和GC-3,5-di GA均可随着浓度的增大而显著抑制细胞上清液中TNF-α、IL-6和IL-10生成。(3)GCG和GC-3,5-di GA均能下调RAW264.7细胞内i NOS、COX-2、TNF-α、IL-6和IL-10 m RNA的转录水平。(4)GCG和GC-3,5-di GA均可下调i NOS和COX-2蛋白的表达。
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