骨碎补总黄酮对大鼠肝脏铁调素基因表达的影响

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目的:探究骨碎补总黄酮(RDTF)对骨质疏松(OP)大鼠的疗效,并通过ELISA、RT-PCR、免疫组化等方法探究RDTF对大鼠肝脏铁调素(HEPC)基因表达的影响。方法:选取60只成年SD雌性大鼠,随机分为20只假手术(SHAM)组,40只去卵巢(OVX)组,采用经典的去势法切除其双侧卵巢,制备OP模型,SHAM组切取同体积脂肪组织。常规饲养3个月后随机抽取SHAM组10只、OVX组10只大鼠处死。检测造模成功后,再次将OP模型大鼠随机分为3组,分别为去势空白组(OVX+B)、中药低剂量组(OVX+L)、中药高剂量组(OVX+H),每组10只。两个中药组分别予以RDTF(低剂量组100mg/kg/d,高剂量组200mg/kg/d)灌服,对照及模型组灌服同体积的双蒸水。4周后取血,肝脏和右侧股骨,进行血清学、基因学、骨组织形态及病理学等方面的检测:①检测骨密度(BMD);②检测血清钙、铁的含量;③ELISA测定血清HEPC的含量;④RT-PCR测定肝脏HEPC mRNA的表达;⑤光镜观察经HE染色的股骨中段切片;⑥免疫组化检测BMP-6在肝脏的表达情况。结果:①检测 BMD 值:SHAM 组>OVX+H 组>OVX+L 组>OVX+B 组。SHAM 组与 OVX+H 组比较,差异无统计学意义(P>0.05);其余各组两两比较,差异均具有统计学意义(p<0.05)。②三组血清钙水平低于假手术组,差异均具有统计学意义(P<0.05),而这三组组间比较,差异均不具有统计学意义(P>0.05);血清铁情况完全相同。③血清HEPC含量:SHAM组、OVX+L组高于OVX+B组、OVX+H组,差异有统计学意义(P<0.05);SHAM组与OVX+L组差异不具有统计学意义(P>0.05);OVX+B组与OVX+H组差异也不具有统计学意义(P>0.05)。④肝脏HEPC mRNA相对定量结果:OVX+H组>SHAM组>OVX+L组>OVX+B组。SHAM组、OVX+L组、OVX+H组与OVX+B组比较,差异有统计学意义(P<0.05);OVX+L组、OVX+H组与SHAM组比较,差异无统计学意义(P>0.05);OVX+L组与OVX+H组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。⑤光镜观察HE切片:骨板致密程度:SHAM组>OVX+H组>OVX+L组>OVX+B组;骨凹陷大小:OVX+B组>OVX+L组>OVX+H组>SHAM组;骨细胞数目:SHAM组>OVX+H组>OVX+L组>OVX+B组;皮质表面平整度:SHAM组>OVX+H组>OVX+L组>OVX+B组。⑥肝脏BMP-6免疫组化结果:BMP-6阳性表达率:OVX+H组>SHAM组>OVX+L组>OVX+B组。SHAM组与OVX+H组比较,差异无统计学意义(P>0.05);其余各组两两比较,差异均具有统计学意义(p<0.05)。结论:①RDTF对大鼠OP有改善作用,且量效关系成正比。②OVX能够降低血清钙、铁的含量,但RDTF并不能影响血清钙、铁的水平。③RDTF对大鼠血清HEPC含量有影响,在低浓度时促进血清HEPC的表达,高浓度时效果效果不显。④OVX能够抑制肝脏HEPC的表达,而RDTF能上调肝脏HEPC的表达,且量效关系成正比。⑤RDTF能够上调肝脏BMP-6的表达,且量效关系成正比。
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