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目的脆性X综合征(Fragile X Syndrome, FXS)是仅次于唐氏综合征的发病率较高的一种遗传性智力低下疾病,为不完全显性X连锁遗传病,其发病机制是因为脱氧三核苷酸串联重复拷贝数大大增加所致,主要表现为智力低下。由于在青春期前儿童的临床表现无特异性,主要依据实验室诊断。目前常用的实验室诊断方法都有不足之处,本研究希望建立一套准确、快速、廉价的实验室检测FXS的方法。方法采用细胞遗传学与分子遗传学相结合的方法。细胞遗传学方法:首先对130例样本的外周血淋巴细胞进行培养,通过加入5-Fdu诱导脆性位点的表达,每个样本镜下分析100个中期细胞,计数X染色体脆性位点的表达情况,脆性位点表达率≥4%为阳性;PCR结合甲基化特异性PCR(MS-PCR)的分子遗传学方法:对上述130例样本的外周血提取基因组DNA,首先对所有男性和女性样本都进行常规PCR扩增FMRⅠ基因(CGG)n重复序列,对不能有效扩增的男性样本和所有女性样本再进行MS-PCR,用亚硫酸氢钠对基因组DNA进行修饰,非甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不变,以修饰后的DNA为模板,用两套不同的引物对(甲基化特异性引物对和非甲基化特异性引物对)扩增FMRⅠ基因的(CGG)n重复序列区,根据扩增产物片段大小判断突变类型。结果对130个疑似病例的外周血细胞遗传学分析发现:有4例X染色体脆性位点检出率≥4%(分析100个细胞,脆性位点≥4)。建立了PCR结合MS-PCR方法,测序表明,常规PCR扩增产物为(CGG)n重复序列;经亚硫酸氢钠修饰后,未甲基化的(CGG)n重复转变为(CAA)n重复序列,甲基化的(CGG)n重复转变为(CGA)n重复序列。并利用该方法对130个临床疑似病例进行分析,130个疑似病例基因组DNA常规PCR都能有效扩增FMRⅠ基因(CGG)n重复序列,产物的(CGG)n重复数都在13-46p之间。结论探索建立了用PCR结合MS-PCR检测FXS的方法。该方法能同时检测到FMRⅠ基因(CGG)n重复数和CpG岛的甲基化情况,并且能对FMRⅠ基因的突变分型,弥补了单独应用PCR、传统的细胞遗传学方法、southern blot等方法的缺点,结合临床表现,为FXS提供了一种准确、快速、廉价的实验室检测方法。