论文部分内容阅读
神经炎症是帕金森病(Parkinson’s Disease,PD),阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)等共有的突出特征。中枢神经系统(Central Nervous System,CNS)内小胶质细胞(microglia,MG)激活是神经炎症的主要组成部分,每当受到伤害或发生疾病时,MG的激活为人体提供了第一道防线。患者尸检、正电子发射断层扫描(Positron Emission Computed Tomography,PET)成像和临床证据表明,在PD的发病过程中,MG会过度激活,释放大量的炎性介质损伤神经元。MG具有两种功能性表型,分别为促炎性M1型和免疫抑制性M2型。M1型MG常常在垂死的神经元和急性炎症之间建立恶性循环。M2型MG则释放多种抗炎细胞因子,抑制炎症反应,促进神经元的存活。因此抑制M1型MG激活,促进MG向M2型分化,可能是治疗炎症相关疾病可行的治疗策略。淫羊藿苷(icariin,ICA)是传统草药淫羊藿的主要活性成分,淫羊藿素(icaritin,ICT)是ICA在体内的主要代谢产物,二者均具有抗神经炎症、抗氧化和抗细胞凋亡的作用。研究显示,ICA和ICT具有类雌激素样作用,具有促乳腺癌细胞增生的作用,此作用与雌激素膜受体——G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)介导的信号转导有关。本课题组前期工作证明,胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)介导的信号途径参与了ICT对抗神经毒素对多巴胺(DA,dopaminergic)能神经元的损伤作用。ICA和ICT的抗炎神经保护作用与GPER和IGF-1R的交互对话相关,但其对MG表型的调控及抑制MG炎症反应的作用靶点,需要进一步探讨。目的1.研究ICA和ICT对原代MG表型极化的作用;2.探索ICA和ICT抑制MG炎症反应的作用靶点及其相关的信号途径。方法1.应用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)制备大鼠中脑原代MG炎症模型;2.采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)技术检测Arg-1、IL-10、IL-1β、TNF-α、i NOS和COX-2的基因表达;3.采用免疫印迹技术(western blot)检测i NOS、COX-2、ERK、p38、JNK和IκB的蛋白表达;4.采用药理阻断及慢病毒介导的si RNA技术干扰GPER和IGF-1R介导的信号途径。结果1.ICA(10μM)和ICT(10μM)单用能够明显诱导M2型MG细胞标志物Arg-1和IL-10的基因表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。2.LPS(0.5μg/m L)能够明显诱导原代MG中炎性因子IL-1β、TNF-α、i NOS和COX-2的基因表达(P<0.001)。ICA和ICT预保护能够抑制上述炎性因子基因的表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001),此作用可以被IGF-1R特异性阻断剂JB-1(1μg)和GPER特异性阻断剂G15(1μM)阻断(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。3.ICA和ICT在蛋白水平上能够抑制LPS诱导的MG中i NOS、COX-2的表达(P<0.001),此保护作用可以被JB-1和G15阻断(P<0.05,P<0.001)。4.LPS能够明显增高ERK、p38、JNK和IκB蛋白的磷酸化水平(P<0.01,P<0.001),ICA和ICT能够抑制上述蛋白的磷酸化水平(P<0.01,P<0.001),此作用可被JB-1和G15阻断(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。5.运用慢病毒介导的RNA干扰技术,敲减BV2小胶质细胞GPER基因表达,与空载病毒组相比,慢病毒组可以明显降低GPER基因的表达(P<0.01),敲除率在50%左右。6.在基因水平,慢病毒干扰组ICA、ICT对IL-1β、TNF-α、i NOS、COX-2的表达的抑制作用明显降低(P<0.01,P<0.001)。7.在蛋白水平,慢病毒干扰组ICA、ICT对i NOS、COX-2的蛋白表达的抑制作用亦明显降低(P<0.05)。结论综上所述,ICA、ICT能够促使原代MG表型向免疫抑制性M2型分化,而且能够抑制LPS诱导的促炎性M1型MG的激活,GPER可能是ICA、ICT抗炎作用的靶点,IGF-1R参与了ICA和ICT的抗炎作用。