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目的在课题前期研究的基础上进一步探讨早期膝骨性关节炎(KOA)的发病机制,研究贵州苗族熏蒸疗法治疗早期KOA家兔的作用机理,观察其对早期KOA家兔软骨组织相关因子蛋白表达的影响。方法本研究以新西兰兔为实验对象,采用向兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶的方法制备早期KOA模型,采用贵州苗药熏蒸组方进行熏蒸治疗,并与清水熏蒸治疗作对照,治疗疗程为20天,治疗结束后,通过大体肉眼观察、光镜下观察关节软骨组织学变化,并进行Mankin’ s评分;蛋白印迹法(Western blot)检测软骨组织中IL-1、TNF-α、Bax、Bcl-2因子蛋白表达的情况。结果(1)大体观察结果:可见到模型对照组关节软骨表面的退行性变化,苗药熏蒸组关节软骨表而退行性变化较模型对照组减轻。(2)光镜观察结果显示:空白对照组:软骨厚度正常,四层结构清楚,潮线清晰、结构完整;软骨表面光滑、平整;软骨细胞正常,软骨陷窝分布均匀,软骨基质染色正常。模型对照组:软骨厚度变薄,四层结构层次紊乱,潮线模糊不清,结构不完整;软骨表层糜烂、纤维化,幅射层和深层软骨基质纤维松散,可见脂肪沉积;表层和辐射层软骨细胞数量明显减少,深层可见簇集的软骨细胞增加、细胞排列紊乱,正常软骨陷窝消失;软骨基质染色重度减少。苗药熏洗组:软骨厚度接近正常,四层结构层次清楚,潮线清晰,但结构较不完整;软骨表面粗糙不平;表层出现纤维化,幅射层和深层软骨基质纤维较正常;软骨细胞数量与正常软骨相当,但软骨细胞排列紊乱,深层可见簇集的软骨细胞,正常软骨陷窝部分消失;软骨基质染色轻度减少。清水对照组:软骨厚度变薄,四层结构层次紊乱,潮线模糊不清,结构不完整;幅射层和深层软骨基质纤维松散,可见少量脂肪沉积;表层和辐射层软骨细胞数量减少,深层可见簇集的软骨细胞,排列紊乱,正常软骨陷窝消失;软骨基质染色重度减少。(3)Mankin’ s评分结果显示:模型对照组与空白对照组评分结果比较明显升高,具有显著性差异(P<0.01);苗药熏蒸组与模型对照组比较评分结果下降,具有显著性差异(P<0.01);苗药熏蒸组与清水对照组比较评分结果下降,具有统计学差异(P<0.05)。(4)western blot检测结果显示:模型对照组较空白对照组比较IL-1、TNF-α、Bax蛋白表达水平显著上升,差异有统计学意义(P<0.05);苗药熏蒸组较模型对照组IL-1、TNF-α、Bax蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);苗药熏蒸组较清水对照组IL-1、TNF-α、Bax表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。模型对照组较空白对照组比较Bcl-2蛋白表达水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);苗药熏蒸组较模型对照组比较Bcl-2蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P<0.05);苗药熏蒸组较清水对照组Bcl-2蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)膝骨性关节炎的病变过程与IL-1、TNF-α、Bax、Bcl-2因子的表达密切相关。(2)通过大体肉眼观察、光镜观察、Markin’ s评分结果及相关因子的蛋白表达情况得出本实验的模型是制备成功的。(3)本实验证实了在KOA关节软骨中存在IL-1、TNF-α、Bax蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,可能是KOA发病机制的一部分。(4)通过western blot检测结果得出,贵州苗族熏蒸疗法能够有效的调控IL-1、TNF-α、Bax、Bcl-2因子蛋白表达,说明该疗法对防治早期KOA有着重要的作用。