论文部分内容阅读
目的:糖尿病肾病是糖尿病的慢性并发症,SREBP1是糖尿病肾脏脂质代谢的主要调控因子。FBXW7是一种E3泛素化连接酶,在肿瘤组织中参与SREBP1的调控,然而FBXW7在糖尿病肾病是否也参与了SREBP1的调控还不清楚。因此本研究采用糖尿病小鼠和体外培养的人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular cells,HKC),探索FBXW7在糖尿病肾脏中的表达及对SREBP1表达的影响。方法:1.以糖尿病小鼠模型和HKC细胞为研究对象,应用免疫组化、免疫荧光、Western blot以及Real-time PCR检测FBXW7蛋白和m RNA的表达情况及SREBP1蛋白的表达情况。2.HKC细胞转染FBXW7重组表达质粒后,采用Western blot、免疫细胞化学和Real-time PCR检测FBXW7、SREBP1蛋白及m RNA的表达。3.HKC细胞转染FBXW7 RNA干扰质粒,采用Western blot、免疫细胞化学和Real-time PCR检测FBXW7、SREBP1蛋白及m RNA的表达。结果:1.FBXW7在糖尿病肾组织和HKC细胞中的表达FBXW7在糖尿病和正常小鼠肾脏分布在肾小管上皮细胞胞浆以及肾小球内,糖尿病组FBXW7表达量低于正常组。SREBP1在糖尿病和正常小鼠肾脏分布在肾小管上皮细胞胞浆,糖尿病组SREBP1表达量高于正常组。HKC细胞给予高糖刺激后,FBXW7蛋白和m RNA在各时间点均显著低于正常糖组,其中72 h组蛋白减少最为明显,较正常糖组减少70%,而m RNA减少最明显的为12 h组。免疫荧光检测FBXW7主要在胞浆表达,荧光强度高糖组较正常糖组减弱。相反地,高糖显著上调了SREBP1的前体片段和成熟片段的表达,其中48 h组增加最为明显。2.FBXW7上调对HKC细胞SREBP1表达的影响与对照质粒组相比,FBXW7重组质粒转染显著上调了HKC细胞FBXW7的表达,下调了SREBP1的蛋白表达,SREBP1的前体和成熟片段分别较空载体组降低了91%和62%。3.FBXW7敲低对HKC细胞SREBP1表达的影响与pGenesil-1-NC质粒组细胞相比,p Genesil-1-FBXW7-1和p Genesil-1-FBXW7-2质粒组的FBXW7蛋白表达量分别减少了29%和41%。相反地,SREBP1的前体和成熟片段较阴性质粒对照组均被明显上调。结论:1.糖尿病小鼠肾小管上皮细胞内FBXW7表达减少,SREBP1表达增多。2.高糖可诱导人肾小管上皮细胞FBXW7表达减少,SREBP1表达增多。3.上调肾小管上皮细胞FBXW7可以降低SREBP1的表达;下调肾小管上皮细胞FBXW7可导致SREBP1表达升高。