【摘 要】
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重组DNA技术是基因工程中一项十分重要的技术,该研究即利用这一技术,构建出了两个重组载体.用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切pROKⅡ质粒,获得betA基因片段作为插入片段,用HindⅢ和EcoR
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重组DNA技术是基因工程中一项十分重要的技术,该研究即利用这一技术,构建出了两个重组载体.用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切pROKⅡ质粒,获得betA基因片段作为插入片段,用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切A质粒作为载体片段,将插入片段与载体片段相连,即构建成含有betA和gus的双基因载体.用HindⅢ单酶切pGAH质粒作为载体片段,将betA基因片段作为插入片段与载体片段相连,即构建出双耐盐基因载体.采用单倍体植株作为遗传传化的材料会避免转基因过程中的嵌合体问题和子代分离问题.该研究以小黑杨花粉为外植体建立了适合转基因的组培再生系统.设置KT和2,4-D的不同浓度梯度组合实验,确定小黑杨花粉愈伤组织最适诱导培养基为MS+2～4mg/L 2,4-D+2mg/L KT;设置BA和NAA的不同浓度梯度,确定芽的最佳诱导培养基为MH+BA 0.1-0.5mg/L+NAA 0.02-0.005 mg/L;组培苗生根的最佳培养基为1/2MS+0.2mg/L NAA.
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