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背景miRNA是一类长约18-25nt的不编码蛋白质单链小RNA分子,通过结合靶基因抑制靶基因的翻译或者降解靶基因来发挥作用。miRNA对肿瘤的影响,是目前研究的热点,有可能成为一种对肿瘤的诊断和治疗的靶点。骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤,好发于青少年,肿瘤的转移是目前肿瘤治疗失败的最重要的原因。本实验室在原有建立的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607的基础上,又从中克隆出了两组具有不同增殖转移能力的亚细胞系,一组是高增殖转移率细胞系E10和低增殖转移率细胞系H9,另外一组高增殖转移率细胞系F5和低增殖转移率细胞系F4。并且均已应用基因芯片技术对两组不同的细胞系进行了分析,找到了若干表达差异的miRNA。miR-192是在这两组不同细胞系中在高增殖转移率细胞系中均高表达的miRNA分子之一,本研究以miR-192做为实验目标,研究其在人骨肉瘤细胞系SOSP-9607中的作用。目的探讨miR-192抑制物对SOSP-9607细胞的作用。为进一步研究miRNA分子在骨肉瘤细胞系中的作用机制奠定基础。方法(1)应用miR-192抑制物屏蔽miR-192的作用。试验分为实验组和对照组。对照组包括miR-192抑制物阴性对照组、脂质体对照组和正常细胞对照组。应用实时定量PCR方法验证miR-192在两种高增殖转移率细胞系中和低增殖转移率细胞系中的表达量差异;应用实时定量PCR检测转染miR-192抑制物和未转染的SOSP-9607细胞中miR-192的表达量差异。(2)MTT法检测miR-192对SOSP-9607细胞增殖抑制率的影响。实验组分为三个梯度,转染miR-192抑制物的浓度分别为:200nmol/L, 100nmol/L, 50nmol/L。(3)流式细胞仪和TUNEL法检测SOSP-9607细胞转染miR-192抑制物后凋亡的变化。流式细胞仪检测SOSP-9607细胞转染miR-192抑制物后周期的变化。结果(1)实时定量PCR显示:E10和F5中miR-192表达量分别比H9和F4中表达量明显升高(10倍左右);转染miR-192抑制物后SOSP-9607和未转染的细胞相比miR-192表达量明显降低(约1/160)。(2)MTT法检测显示,与抑制物阴性对照组相比,实验组明显抑制SOSP-9607细胞的增殖(P<0.01),并且具有明显的剂量依赖性,miR-192抑制物浓度从50nmol/L上升至200nmol/L,抑制率逐渐增高(P<0.01)。(3)流式细胞仪检测显示,实验组凋亡率[(13.6±2.1)%]与阴性对照组凋亡率[(7.1±0.5)%]相比明显增高(P<0.01)。实验组和对照组相比,处于G1期细胞明显增高,处于G2期细胞明显减少,S期细胞显著减少(P<0.01)。TUNEL法检测显示,实验组凋亡细胞(每100倍视野10个以上)和对照组凋亡细胞(相同倍数视野约0-4个)相比,凋亡率明显增高(P<0.01)。结论(1)miR-192在高增殖转移率细胞系中高表达,而在低增殖转移率细胞系中低表达;miR-192抑制物对miR-192表达的抑制效果明显。(2)miR-192抑制物明显抑制SOSP-9607细胞的增殖。(3)miR-192抑制物显著增加SOSP-9607细胞的凋亡率,使SOSP-9607细胞的周期发生停滞。miR-192抑制物影响SOSP-9607细胞的增殖凋亡和周期,但是其具体的作用机制需要进一步的研究。