乳品中β-内酰胺酶检测方法的对比研究

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β-内酰胺酶是由对β-内酰胺类抗生素耐药菌株分泌的一种胞外酶。该酶可选择性分解β-内酰胺类抗生素,能够使青霉素内酰胺结构破坏而失去活性。一些不法商贩就是看中了β-内酰胺酶的这一特性,非法往含有抗生素的牛乳中添加β-内酰胺酶,从而使得检测抗生素时牛乳可以达标。随着国家、人民对食品安全问题的重视程度日益增加,β-内酰胺酶的检测也成为了乳品质量检测中的一部分,尤其是在生鲜乳的收购环节。其中,国标中的检测方法为杯碟法,该方法准确但是对实验室的条件要求较高;药典中的碘量法可以检测出反应的和未反应的β-内酰胺酶,但是重现性较差;而方便快捷的试剂盒又太过于昂贵,不适合小型奶站、检测机构使用。所以,本论文旨在对比各方法的优异,以方便检测者可以根据自身的情况选择检测方法,严格控制乳品安全。国标中的杯碟法是利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性,并加入青霉素作为对照,通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑菌圈的大小差异来确定样品中是否含有β-内酰胺酶。根据该实验方法研究其检出限,得出检出限为0.2U/L。碘量法的原理为β-内酰胺酶分解青霉素后产生的青霉噻唑酸与淀粉竞争游离碘,破坏了碘与淀粉的蓝色复合物,使蓝色变为无色,从而判断牛奶中是否掺有β-内酰胺酶。试验中为了保障试验的重复性和准确性,对样品离心除去脂肪,改良后的试验准确性提高,防止了假阳性的现象,重复性良好,得出其检出限。选取市面上较常见的三种试剂盒,对比各自的检出限及反应所需时间。试剂盒的重复性和准确度都可以与杯碟法媲美,其检测关键在于样品与试剂混合反应的时间和温度的控制。但是试剂盒普遍昂贵,许多小型的奶站、检测机构等无法负担。同时,利用以上三种方法对所在城市周边地区的奶站、乳品厂的产品进行抽样调查。
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