EGFR抑制剂C225联合奈达铂对宫颈癌hela细胞增殖和凋亡的影响

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背景和目的:宫颈癌(cervical cancer)是妇女最常见的恶性肿瘤之一。近20年来,发病率有回头趋势,且呈现年轻化特点。随着患者越来越注重生存质量的提高以及保留生育能力意识的增强,传统手术和放疗对患者生活质量存在不可逆的影响,使得宫颈癌化疗受到了越来越多的关注。表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)在很多实体瘤包括宫颈癌中都有过量表达,与肿瘤细胞的恶性生物学特征和患者预后密切相关。EGFR(?)抑制剂已成为靶向治疗热点。西妥昔单抗(cetuximab, C-225),是常见的特异性EGFR抑制剂,临床上已经用于晚期头颈部鳞癌和直肠癌的治疗,取得了满意的疗效。但在治疗宫颈癌的研究中,国外和国内还很少见。奈达铂(nedaplatin, NDP),属第二代有机铂类抗肿瘤药物。与顺铂相比,胃肠道反应轻,肾毒性和神经毒性小,疗效与顺铂相同。但NDP的剂量限制毒性是血小板减少,部分患者因发生严重的血小板下降导致化疗停止。临床上已试图寻找奈达铂增敏药物或联合用药以增强奈达铂疗效,降低其毒副作用。EGFR抑制剂联合化疗药物受到越来越多的关注。有临床研究提出EGFR特异性抑制剂西妥昔单抗C225可增敏化疗药物的细胞杀伤作用,但C225与NDP合用的疗效,国内外尚未见报道。本实验旨在探讨C225单药及C225与NDP联合对hela细胞的增殖的影响。为C225在宫颈癌中的临床应用提供理论依据。对象和方法:复苏并培养宫颈癌hela细胞,实验分组:1、C225单药组,浓度分别是:10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、160mg/L。2、NDP单药组,浓度分别是:1mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L。3、联合用药组,药物浓度是C225浓度40mg/L分别联合NDP备浓度。实验设空白组、对照组,空白组是RPMI1640培养液,对照组是单细胞悬液,每孔设5个平行对照。各实验组各浓度分别作用于hela细胞24小时、48小时、72小时,用MTT法检测细胞抑制率,用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期。采用SPSS17.0统计分析实验数据。以α=0.05作为检验标准。结果:1用MTT法测C225单药作用hela时的细胞抑制率随着药物浓度的增加(10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L),细胞抑制率缓慢增加,P>0.05,差异无统计学意义。药物浓度160mg/L与以上五个药物浓度的细胞抑制率相比,P<0.05,差异有统计学意义。每个药物浓度随着作用时间的延长(24h、48h、72h),细胞抑制率缓慢增加,P>0.05,差异无统计学意义。提示C225单药对hela细胞的增殖抑制作用没有明显的时间、浓度依赖。2用MTT法测NDP单药作用hela时的细胞抑制率随着药物浓度的增加(1mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L),细胞抑制率明显增加,P<0.05,差异有统计学意义。每个药物浓度随着作用时间的延长(24h、48h、72h),细胞抑制率逐渐增加,P<0.05,差异有统计学意义。提示NDP单药对hela细胞的增殖抑制作用存在明显的时间、浓度依赖。3用MTT法测C225和NDP联合应用时的细胞抑制率联合用药的细胞抑制率明显高于对应的C225单药或NDP单药,相比P<0.05,差异有统计学意义。根据公式计算联合指数,当细胞抑制率未达到50%时表现为两药协同,当细胞抑制率接近或超过50%时表现为两药相加。4流式细胞仪检测凋亡率联合用药后凋亡率均大于对应的NDP单药或C225单药,与单药相比,P<0.05,差异有统计学意义。5流式细胞仪检测细胞周期与对照组相比,C225单药或NDP单药均有G0~G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比降低,P<0.05,差异有统计学意义。与C225单药或NDP单药相比,联合用药后G0-G1期细胞百分比明显增加,S期细胞百分比明显降低,P<0.05,差异有统计学意义。联合用药的G2-M期细胞与单药相比,P>0.05,差异无统计学意义。结论:1C225单药对宫颈癌hela细胞没有明显的杀伤作用。2NDP单药对宫颈癌hela(?)细胞有较强杀伤作用,且呈现浓度和时间依赖。3C225可增加hela细胞对NDP的敏感性,促进细胞凋亡
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