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目的:通过筛选出小鼠心脏异位移植模型移植物中显著差异表达的miRNA,探讨其体外调控吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制CD4~+T细胞活化的机制,以期探索miRNA影响免疫排斥的机理。方法:(1)通过显微外科技术建立小鼠心脏异位移植模型,对移植后供体心脏进行miRNA芯片筛选,对有明显差异表达的miRNA进行生物信息学分析预测寻找以IDO为靶基因的miRNA,qRT-PCR法验证芯片筛选结果。(2)携带miRNA基因的慢病毒转染3T3细胞,分3组,即miRNA过表达组、miRNA沉默组及空质粒对照组。qRT-PCR法检测转染后各组miRNA表达水平;qRT-PCR法检测转染后各组IDO mRNA表达水平,Western blot法检测转然后各组IDO蛋白表达水平。(3)体外分化诱导培养BALB/c小鼠脾脏DC,携带IDO基因的慢病毒转染DC,Western blot法检测IDO蛋白表达水平。(4)免疫磁珠分选C57BL/6小鼠CD4~+T细胞,与转染后DC进行单向淋巴细胞混合培养,CCK-8法检测细胞增殖情况,Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果:(1)miRNA芯片筛选结果显示171个miRNA表达差异显著,其中93个表达显著上调,78个表达显著下调。其中miR-669b-3p上调近5倍,且生物信息学分析预测可能以IDO为靶基因,qRT-PCR验证miR-669b-3p上调4.7±0.9倍,与芯片结果一致。(2)qRT-PCR检测miR-669b-3p过表达组的miR-669b-3p表达水平为空质粒对照组的10.1±4.8倍,miR-669b-3p沉默组的miR-669b-3p表达水平为空质粒对照组的0.3±0.1倍。qRT-PCR检测miR-669b-3p过表达组的IDO mRNA表达水平为空质粒对照组的0.4±0.1倍,miR-669b-3p沉默组的IDO mRNA表达水平为对照组的3.3±1.0倍,Western blot检测转染后miR-669b-3p过表达组的IDO与内参灰度值比值为0.439±0.012,miR-669b-3p沉默组的IDO与内参灰度值比值为0.767±0.027,空质粒对照组的IDO与内参灰度值比值为0.583±0.016,各组间对比差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)体外分化诱导获得BALB/c小鼠脾脏DC,流式细胞数检测DC表面抗原CD11c、CD80、CD86、MHC II分别为89.5%±1.9%、97.0%±2.2%、92.2%±2.8%、87.1%±2.5%,符合DC表面抗原特点。Western blot检测转染后IDO~+DC组IDO与内参灰度值比值为0.956±0.035,空质粒DC组为0.725±0.031,两组间对比差异有统计学意义(P<0.05)。(4)流式细胞术检测免疫磁珠法分离获得的C57BL/6小鼠脾脏CD4~+T淋巴细胞的阳性率为96.1±2.9%。单向淋巴细胞混合培养CCK-8法检测结果显示IDO~+DC组刺激指数为9.5±0.5%,低于DC组11.5±0.6%,差异有统计学意义(P<0.05)。Annexin-V/PI检测结果显示IDO~+DC组凋亡率为20.9±3.4%,高于DC组10.7±1.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)在小鼠心脏异位移植免疫排斥反应中出现多个miRNA显著的差异性表达,其中miR-669b-3p经生物信息学分析预测可能以IDO为靶蛋白(2)miR-669b-3p可在体外抑制细胞内IDO表达。(3)IDO可在体外抑制CD4~+T细胞的增殖并增加其凋亡。(4)miR-669b-3p可能通过调控IDO影响CD4~+T细胞活性。