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目的: 随着全球经济的快速发展,环境汞污染问题日趋严峻,我国是世界上汞用量大国,也是世界上汞污染最为严重的区域之一,孕妇和胎儿为汞的易感人群,近年来,全球范围内单独对锌和汞的研究较为多见,而关于孕期补锌与拮抗汞毒性关系的研究国内外多为动物实验,在临床上的研究非常少见。本课题立足在临床上研究孕期补锌对母胎汞毒性的拮抗作用,并探讨其相关抗凋亡、抗氧化损伤机制。 方法: 第一部分:采用原子吸收法测定母血、脐血全血中血汞、胎盘汞含量;采用微波消解和质谱分析方法测定母血、脐血血清中血锌、胎盘锌含量,根据孕中期母血汞值选取对照组、病例组、治疗组孕妇各30例,分析母血、脐血、胎盘汞水平的相关性;分析母血、脐血、胎盘锌水平的相关性;分析母血、脐血、胎盘的汞、锌水平相关性;分析脐血汞与新生儿头围、身长、出生体重的相关性。应用方差分析及t检验比较三组孕妇孕中、晚期母血汞、锌水平;应用卡方检验比较三组孕妇妊娠结局;应用方差分析比较三组新生儿头围、身长、出生体重及新生儿神经发育评分。 第二部分:采用方差分析,应用蛋白质印迹法分析3组胎盘细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达水平,应用原位末端标记法检测3组胎盘凋亡细胞阳性率。 第三部分:采用方差分析,应用脂质过氧试剂盒比较3组胎盘谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)表达水平。应用酶联免疫分析(ELISA)比较3组胎盘金属硫蛋白(MT)表达水平。 结果: 第一部分: 1.孕晚期母血汞与脐血汞、母血汞与胎盘汞水平、脐血汞与胎盘汞水平分别呈显著正相关(r分别=0.98,0.83,0.85,P均<0.05)。孕晚期母血锌与脐血锌、母血锌与胎盘锌水平、脐血锌与胎盘锌水平分别呈显著正相关(r分别=0.95,0.92,0.96,P均<0.05)。孕晚期母血汞与母血锌、脐血汞与脐血锌、胎盘汞与胎盘锌水平呈显著负相关(r分别=-0.97,-0.99,-0.81,P均<0.05)。脐血汞与新生儿头围、身长、出生体重呈显著负相关(r分别=-0.86,-0.49,-0.75,P均<0.05)。 2.病例组、治疗组孕妇孕中期母血汞水平(6.17±0.31ug/L,6.15±0.26ug/L)均高于对照组(2.43±0.60ug/L)(P均<0.05)。病例组、治疗组孕妇孕中期母血锌水平(479.60±60.94ug/L,480.73±60.64ug/L)均低于对照组(769.80±56.09ug/L)(P均<0.05)。孕晚期母血汞水平病例组(6.16±0.32ug/L)>治疗组(3.42±0.52ug/L)>对照组(2.46±0.52ug/L)(P均<0.05)。孕晚期母血锌水平病例组(483.25±62.20ug/L)<治疗组(671.34±44.65ug/L)<对照组(761.79±49.92ug/L)(P均<0.05)。治疗组孕晚期母血汞水平低于孕中期(P<0.05)。治疗组孕晚期母血锌水平高于孕中期(P<0.05)。 3.病例组早产、胎膜早破、小于胎龄儿的发生率均高于治疗组(OR分别=10.55,5.21,5.09,P均<0.05)。病例组早产、胎膜早破、小于胎龄儿的发生率均高于对照组(OR分别=10.55,8.11,10.55,P均<0.05)。 4.病例组新生儿头围、身长、出生体重(32.72±0.82cm,48.42±2.21cm,2753.0±537.06g)均低于治疗组(34.67±0.79cm,49.67±0.99cm,3371.2±382.85g)(P均<0.05);病例组新生儿头围、身长、出生体重均低于对照组(35.05±0.74cm,49.82±1.22cm,3495.0±77.82g)(P均<0.05)。 5.病例组新生儿神经发育评分总分、行为能力、被动肌张力(35.73±1.31,9.83±0.79,6.80±0.48)均低于治疗组(38.27±1.05,11.10±0.76,7.77±0.43)(P均<0.05)。病例组新生儿神经发育评分总分、行为能力、被动肌张力、主动肌张力(35.73±1.31,9.83±0.79,6.80±0.48,7.10±0.72)均低于对照组(38.50±0.97,11.30±0.60,7.63±0.49,7.53±0.57)(P均<0.05)。 第二部分: 1.病例组胎盘Bcl-2表达水平(2055.97±280.82)低于治疗组(5187.93±247.89)、对照组(5308.83±259.97)(P均<0.05),病例组胎盘Bax表达水平(3110.38±136.09)高于治疗组(2015.76±177.63)、对照组(2009.90±152.61)(P均<0.05)。 2.病例组胎盘凋亡细胞阳性率(35.20±4.96%)高于治疗组(13.47±2.43%)、对照组(13.27±2.21%)(P均<0.05)。 第三部分: 1.胎盘GSH-PX活性病例组(8.79±1.28 U/mg)<治疗组(19.87±1.41U/mg)<对照组(30.34±2.81U/mg)(P均<0.05),胎盘SOD活性病例组(133.54±15.40U/mg)<治疗组(281.87±12.33U/mg)<对照组(390.21±17.19U/mg)(P均<0.05),胎盘CAT活性病例组(32.50±14.58U/mg)<治疗组(74.13±14.01U/mg)<对照组(177.44±14.87U/mg)(P均<0.05),胎盘MDA含量病例组(10.13±1.26nmol/mg)>治疗组(6.18±0.70nmol/mg)>对照组(2.82±0.63nmol/mg)(P均<0.05)。 2.胎盘MT表达水平病例组(786.54±108.04)<治疗组(1793.86±106.16)<对照组(2789.73±109.93)(P均<0.05)。 结论: 1.孕晚期母血汞、脐血汞、胎盘汞水平两两之间呈显著正相关;孕晚期母血锌、脐血锌、胎盘锌水平两两之间呈显著正相关;元素汞与元素锌水平呈显著负相关;脐血汞与新生儿头围、身长、出生体重呈显著负相关。 2.治疗组孕晚期母血汞水平低于病例组,血锌水平高于病例组;治疗组孕晚期母血汞水平低于孕中期,血锌水平高于孕中期;病例组早产、胎膜早破、小于胎龄儿的发生率均高于治疗组、对照组;病例组新生儿头围、身长、出生体重均低于治疗组、对照组;病例组新生儿神经发育评分总分、行为能力、被动肌张力均低于治疗组;病例组新生儿神经发育评分总分、行为能力、被动肌张力、主动肌张力均低于对照组;母血汞升高可能会增加妊娠不良结局发生率,影响新生儿生长发育及神经系统发育,孕期合理补锌可拮抗汞对母胎的毒性作用。 3.病例组胎盘Bcl-2表达水平低于治疗组,Bax表达水平高于治疗组,胎盘凋亡细胞阳性率高于治疗组。孕期合理补锌可拮抗汞对母胎的毒性作用,其机制可能与锌可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,从而抗凋亡相关。 4.病例组胎盘GSH-PX、SOD、CAT活性均低于治疗组,MDA含量高于治疗组,MT表达水平低于治疗组。孕期合理补锌可拮抗汞对孕妇及胎儿的毒性作用,锌的抗氧化损伤作用可能是其重要机制之一。