论文部分内容阅读
正文:第一部分:伴胸腺瘤重症肌无力患者外周血Th17细胞比例及细胞因子表达量变化目的:重症肌无力(myasthenia gravis, MG)是T细胞辅助、乙酰胆碱受体抗体(AchR-Abs)介导的神经肌肉接头传递障碍的自身免疫性疾病。Th17细胞在MG发病机制中的作用仍不明确。本研究目的为探索伴胸腺瘤MG患者外周血中Th17细胞比例及其相关炎性细胞因子表达是否发生变化。方法:共分为三组:伴MG胸腺瘤组(TM) 35例、伴MG胸腺增生组(TH) 22例、健康对照组(HC ) 22例。使用流式细胞术实验检测MG患者及健康对照外周血Th17细胞比例;采用实时定量PCR和ELISA检测Th17细胞相关细胞因子mRNA、和蛋白表达量。结果:TM组外周血Th17细胞比例显著高于HC (P<0. 05 ) , TH组与HC组Th17细胞比例无统计学差异(P>0.05); TM组IL-17、IL-1β,IL-6及IL-23mRNA及蛋白表达量显著高于对照组(P<0. 05 ),然而TH组与HC组IL-17、IL-6及IL-23mRNA及蛋白表达量差异无统计学意义(P>0. 05 ),TH组IL-1 β蛋白表达量显著高于HC组(P<0. 05 )。结论:MG胸腺瘤中Th17细胞增多,相关炎性细胞因子表达增多,可能参与MG发病。第二部分:microRNA-19b在伴胸腺瘤重症肌无力发病中表观遗传调控机制研究目的第一部分研究结果发现伴胸腺瘤MG患者的外周血Th 17细胞升高,然而Th17细胞的上游调控机制仍不清楚。胸腺间质淋巴细胞生成素(TSLP )是Th17细胞分化发育的上游调控分子。microRNA通过转录后调控机制调控蛋白表达水平和生物学功能,然而microRNA在胸腺瘤细胞发育和分化一直未见报道。本研究着眼于探索伴MG胸腺瘤组织中TSLPmRNA及蛋白的表达水平以及证实microRNA-19b-TSLP-Th17细胞信号通路参与MG发病的分子机制。方法分为三组:胸腺瘤伴MG组(MG-T) 52例、单纯胸腺瘤不伴MG组(NMG-T )12例和健康对照组(HC ) 11例。使用RT-PCR和Western blot测定各组胸腺瘤组织中microRNA-19b及TSLP的mRNA和蛋白表达水平;体外实验采用荧光素酶报告基因实验验证microRNA-19b对于TSLPmRNA的靶向调控关系;使用Spearman相关分析分析microRNA-19b与TSLPmRNA以及蛋白表达量的相关性。结果MG-T组和NMG-T组TSLPmRNA转录量及蛋白表达量显著低于正常对照;同时MG-T组TSLP蛋白表达量低于NMG-T组,差异有统计学差异(P<0. 05 );各种不同类型胸腺瘤组织TSLPmRNA转录量存在显著差异,B2组TSLP、B3组TSLP低于正常胸腺。荧光素酶报告基因实验证实microRNA19b-5p通过与TSLP3 ’UTR的相互作用靶向调控TSLPmRNA表达。胸腺瘤microRNA19b-5p成熟体、前体、初级转录体转录量显著高于正常胸腺。microRNA19b-5p成熟体、初级转录体、前体与TSLP蛋白表达呈负相关。结论伴MG胸腺瘤组织中microRNA19b-5p表达上调,负向靶向调控TSLPmRNA表达,下调TSLP蛋白表达,进而可能影响Th17细胞的分化发育,microRNA-19b-TSLP-Th17细胞信号通路可能与MG发病相关。