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近些年来,我国政府不断加大生物产业的科技投入,特别是针对自2003年以来爆发的SARS、甲型流感、埃博拉等高致病性病毒的研究工作。科研人员在实验操作中容易接触到可以传染疾病的生物材料,这些生物材料会对实验人员的生命和健康造成严重危害。关于生物安全评价的检测和研究工作越来越受到重视,同时人员防护装备性能及其评价也显得尤为重要。因此积极深入开展针对模式病毒测量新方法研究,同时制定更严格的计量标准,以此提高人员防护装置性能评价的准确性,为监测环境中病原微生物提供计量支撑。本研究以模式病毒噬菌体ΦX 174为研究对象,制备了噬菌体ΦX 174标准物质,克隆噬菌体ΦX 174 gpG和gpH蛋白基因并构建表达载体,制备抗gpG和gpH蛋白的单克隆抗体。利用流式细胞仪进行检测,建立了基于流式技术检测噬菌体ΦX 174的方法。具体实验成果如下:1.利用冻干技术,制备出噬菌体ΦX 174饼状标准物质。制备出的噬菌体ΦX 174标准物质具有良好的均匀性和稳定性,可以稳定保存四个月。2.成功克隆gpG和gpH基因,并构建表达载体,诱导表达重组蛋白gpG和gpH。3.以纯化的gpG和gpH蛋白为抗原,制备抗gpG和gpH蛋白的单克隆抗体。获得了10株能够稳定分泌抗gpG和gpH的杂交瘤细胞株。4.本研究首次建立针对病毒核酸、蛋白质外壳特异性双重荧光标记方法,该方法可以保证检测到的病毒是具有侵染能力的活病毒。5.通过优化流式细胞仪系统参数、噬菌体ΦX 174荧光标记方法,建立流式细胞仪检测噬菌体ΦX 174的方法。流式测量结果呈线性关,R~2=0.9998。流式检测方法与空斑计数法之间具有良好的线性关系,R~2=0.9985。本研究所建立的流式检测方法重复性较高,方法稳定性好。6.改进病毒计数仪标记方法,建立病毒计数仪检测噬菌体ΦX 174的方法。毒计数仪3100检测结果呈线性关系,R~2=0.998。病毒计数仪3100与空斑计数法之间具有良好的线性关系,R~2=0.9904。本研究所建立的病毒计数仪3100方法重复性较高,方法稳定性好。7.通过优化量化成像分析流式细胞仪系统参数,建立流式显微成像仪检测噬菌体ΦX174的方法。量化成像分析流式细胞仪检测结果呈线性关系,R~2=0.988。量化成像分析流式细胞仪检测方法与空斑计数法之间具有良好的线性关系,R~2=0.992。本研究所建立的流式显微成像仪检测方法重复性较高,方法稳定性好。8.本研究所建立的三种流式检测方法相比于空斑计数法具有检测时间短,准确性高,重复性好等优点,为其他致病性病毒的检测提供技术支持。