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目的:自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)是一种多因素参与的自身免疫性疾病。其特征是免疫系统对肝自身抗原的免疫耐受下降,导致肝实质逐渐破坏。目前的治疗方式是非特异性免疫抑制药物,尽管多数患者反应良好但部分患者反复发作难以停药,并且长期使用免疫抑制药物有潜在危害。特异性的免疫疗法,如拮抗肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)和炎性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)中广泛应用,并且成为一线治疗方法。抗TNF-α治疗在AIH患者中进行了测试,并且有效阻止患者肝损伤的进展。C87是一种小分子TNF-α拮抗剂,可在体内和体外有效的拮抗TNF-α下游信号的传导。本研究使用刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠肝损伤,建立自身免疫性肝炎模型。给予自身免疫性肝炎小鼠不同剂量C87,评价C87对肝损伤的治疗效果并研究C87可能的治疗机制。第一部分:C87对自身自身免疫性肝炎小鼠治疗效果的研究方法:以10周龄雌性C57B6小鼠为研究对象,将小鼠分为三组给予不同剂量的15mg/kg Con A组、20mg/kg Con A组和25mg/kg Con A组。通过ELISA检测小鼠8、12和24小时血清中AST、ALT水平并记录72小时生存。每组取3只小鼠,Con A注射后12h留取肝脏标本,观察肝脏颜色并记录肝脏重量。HE染色观察肝脏淋巴细胞浸润与坏死面积。通过静脉注射25mg/kg剂量Con A建立自身免疫性肝炎小鼠模型,将小鼠分为非治疗组、英夫利西单克隆抗体治疗组、10mg/kg C87治疗组、20mg/kg C87治疗组和30mg/kg C87治疗组。通过ELISA检测小鼠8、12和24小时血清中AST、ALT水平并记录72小时生存。每组取3只小鼠,Con A注射后12h取肝脏标本,观察肝脏颜色并记录肝脏重量。HE染色观察肝脏淋巴细胞浸润与坏死面积。结果:1、Con A诱导的肝损伤呈剂量依赖性。给予不同剂量的Con A,小鼠血清中的ALT、AST在8、12、24小时随着Con A剂量的增加而升高。并且25mg/kg的Con A注射后,小鼠的肝损伤在24小时内持续加重直至死亡,死亡率为80%。在25mg/kg剂量下,小鼠出现致死性的免疫性肝损伤。2、给予不同剂量的C87进行治疗,30mg/kg的C87具有治疗作用。与对照组相比C87治疗后,小鼠血清中的AST和ALT在8、12、24小时均下降。并且C87治疗后24小时AST和ALT明显下降,肝损伤趋于好转。C87治疗后72小时生存率提高到90%,C87治疗可以挽救致死性的自身免疫性肝炎。3、C87治疗后肝脏坏死面积明显减少。肝脏标本显示,C87治疗后肝脏充血明显缓解,并且重量降低。C87治疗对肝脏具有保护作用。第二部分:C87对自身免疫性肝炎小鼠治疗机制的研究方法:以10周龄雌性C57B6小鼠为研究对象,将小鼠分为非治疗组和C87治疗组。通过Luminex?x MAP对小鼠Con A注射后1、2、4、8、12和24小时的细胞因子和趋化因子进行检测并进行分层聚类分析。通过流式技术检测12小时肝脏中浸润的淋巴细胞数量。使用Western blotting对肝脏MLKL表达量进行检测。结果:1、Con A注射后引起肝脏损伤,血清中大量细胞因子和趋化因子升高。这些细胞因子包括,IL-12、MIP-1β、IL-4、IL-18、IL-6、LIF、IFN-γ、IL-1α、TNF-α、IL-22、IL-12、CXCL1、CCL5、CXCL10、MCP-1、CXCL5、MIP-1α。2、C87治疗后,小鼠血清中参与Th1反应的细胞因子(IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α)降低;参与T细胞趋化的趋化因子(MIP-1β、MCP-1、MIP-1α、CCL5)降低;参与急性时相反应的细胞因子(IL-6、LIF、IFN-γ)降低。C87治疗后降低小鼠体内的炎症反应,特别是与Th1反应相关的细胞因子。3、多种免疫细胞参与Con A诱导的自身免疫性肝炎,Con A注射后12小时肝脏中浸润的T细胞、NK细胞、中性粒细胞和巨噬细胞明显升高。C87治疗后肝脏中8、12和24小时浸润的CD8~+T细胞和CD4~+T细胞数量明显减少,其他免疫细胞数量无明显的变化。脾脏中的CD8~+T细胞和CD4~+T在Con A注射后明显升高,并且在C87治疗后降低。C87抑制T细胞向肝脏的浸润并且减少脾脏中T细胞的数量。4、Con A诱导的肝损中,肝细胞中MLKL表达和Caspase-3活性增强。C87治疗后MLKL表达和活化减少,而Caspase-3活性活性无明显变化。结论:1、C87对Con A诱导的肝损伤具有治疗作用2、C87减少Th1免疫相关细胞因子和趋化因子的表达,并且减少肝脏中浸润的CD4~+T细胞和CD8~+T细胞。C87可能通过抑制Th1反应治疗自身免疫性肝炎。3、C87通过拮抗TNF-α坏死性凋亡信号,减少信号下游MLKL的表达,从而减少肝细胞的死亡。