本文分离鉴定了梅花鹿源牛病毒性腹泻病毒BVDV(CCSYD株)；对4株(CCSYD株和另外3株梅花鹿源BVDV分离株(CCJYD株、CCKCD株、JLCYD株))BVDVNS2-3基因和CCSYD分离株E0基因进行了克隆与序列分析；对CCSYD分离株E0基因进行了原核表达和真核表达；检测了CCSYD分离株基因苗的免疫原性；筛选了CCSYD分离株BVDV敏感药物。结果如下： 1对从吉林省长春市双阳区梅花鹿流产胎儿肝脏病料中分离出的病毒，进行了系统的鉴定。结果表明：该毒株接种于MDBK传代细胞后出现了BVDV典型而规律的细胞病变，其理化特性与BVDV相同，致细胞病变作用可被BVDV国际标准株C24V株的牛阳性血清所阻断，电镜负染观察病料接种MDBK细胞的F1代浓缩病毒液，可见典型的BVDV粒子形态，从F1代浓缩病毒液中分别扩增出402bp(NS2-3)和706bp(E0)的目的片段。证明该毒株是BVDV，命名为CCSYD株。 2对从吉林不同地区分离的4株(CCSYD株，CCJYD株、CCKCD株、JLCYD株)BVDV的NS2-3基因外源序列插入区进行了RT-PCR扩增，将该扩增片段与pMD18-T连接后转化JM-109工程菌，构建成重组克隆质粒pMD18-T/NS2-3，并测定其序列，将测定的核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比较分析。结果表明：CCSYD分离株NS2-3扩增区核苷酸序列与BVDV其他株相比的同源性，依次为VEDEVAC株100％，184株99.3％，H株96.6％，ZM95株98％，OSLOSS株94.9％，Draper株92.6％，ILLC株92.4％，SNC株91.1％，YAK株82.3％，D株83.0％，3142株84.8％，3887株84.3％，C24V株83.2％，NADL株83.4％，SD1株83％，Singer株82.8％，06-APR-1993株77.0％，NY-1株75.8％，CCKCD株42.3％，CCJYD株42.3％，JLCYD株42.5％。CCSYD株NS2-3扩增区氨基酸序列与BVDV其他株相比的同源性，依次为VEDEVAC株100.0％，184株99.4％，H株94.5％，ZM95株95.7％，OSLOSS株93.3％，Draper株93.9％，ILLC株93.3％，SNC株92.0％，YAK株88.3％，D株90.2％，3142株92.0％，3887株89.0％，C24V株86.5％，NADL株88.3％，SD1株90.8％，Singer株87.1％，06-APR-1993株82.8％，NY-1株72.4％，CCKCD株28.2％，CCJYD株28.2％，JLCYD株28.2％。本次分离的CCSYD株BVDV在这一区域中既没有外源序列的插入，也没有基因重组、基因重排或基因缺失，但存在某些核苷酸的替换；而另外3个分离株则有外源序列的插入和基因重排；表明病毒的致细胞病变作用除与外源序列的插入、基因重组、基因重排或基因缺失有关外，还与核苷酸的替换有关。CCSYD株属基因Ib亚型，CCJYD株、CCKCD株、JLCYD株属待定基因型。 3对从梅花鹿的流产胎儿肝脏中分离出CCSYD株BVDV的E0基因进行了RT-PCR扩增，将该扩增的片段与pMD18-T连接后转化JM-109工程菌，构建重组克隆质粒pMD18-T/E0，并测定其序列，将其与已报道的瘟病毒代表株相应序列做了比较，预测了E0蛋白的抗原表位、亲水性和等电点等。结果表明：CCSYD分离株E0基因大小为681bp，与报道9株BVDV(VEDEVAC、Bega、C24V、ILLC、NADL、OSLOSS、R1935、SD-1、Y546)和7株猪瘟病毒(ALD、Brescia、c、GPE、儿、LN9912、SM)及3株羊边界病毒(BD31、C413、BDVX818)相比，核苷酸序列的同源性依次为98.6％-84.8％、76.1％-74.7％、77.0％-76.7％;氨基酸的同源性分别为98.7％-91.6％、79.9％-78.3％、83.9％-80.6％；CCSYD株E0蛋白等电点7.61，在pH值7.0时，带的电荷为1.99；CCSYD分离株E0蛋白的抗原性指数、亲水性峰值都较高的区域有8-16、23-29、59-67、70-81、96-109、114-122，127-134、137-143、165-172、186-198、213-221；以E0基因为判定依据，CCSYD分离株也为基因Ib亚型，E0基因的核苷酸序列可做为BVDV基因分型的依据。 4将测序正确的pMD18-T/E0克隆质粒双酶切(BmH1和Xho1)得E0基因，然后将E0基因亚克隆到pET28a载体相同酶切位点，构建了原核表达质粒pET28a/E0，将这个质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行酶切鉴定和PCR鉴定，对鉴定的阳性菌进行IPTG诱导表达。结果表明：成功构建了原核表达质粒pET28a/E0，重组菌在IPTG诱导下能表达目的蛋白，其含量占菌体总蛋白的9.25％。 5将测序正确的pMD18-T/E0克隆质粒双酶切(BmH1和Xho1)得E0基因，然后将E0基因亚克隆到PVAX1载体相同酶切位点，构建了真核表达质粒PVAX1/E0，并用脂质体转染BHK-21细胞进行真核表达。结果表明：RT-PCR法检测到E0目的基因在BHK-21细胞进行了转录；用间接ELISA法检测结果显示，构建的真核表达质粒PAX1/E0在体外真核细胞中已表达E0目的蛋白。 6用梅花鹿源BVDV基因苗(PVAX1/E0)不同免疫剂量和免疫次数免疫家兔，间接ELISA检测其血清抗体应答水平，淋巴细胞转化实验检测其细胞免疫应答水平，并将其免疫应答水平与BVDV梅花鹿源分离株和C24V标准株进行了比较。结果表明：梅花鹿源BVDV基因苗免疫家兔既可产生体液免疫又可产生细胞免疫应答。基因苗高剂量组比低剂量组体液免疫应答水平和细胞免疫应答水平高，基因苗免疫次数对体液免疫应答水平和细胞免疫应答均无影响。 7采用组织细胞培养方法，测试了利巴韦林、黄芪、鱼腥草、干扰素a2b、莪术油、双黄连粉针剂共6种抗病毒药物在MDBK细胞体外培养中的最大安全浓度。进一步测定了这6种药物成分对梅花鹿源BVDV感染MDBK细胞的影响，以筛选出对梅花鹿源BVDV较敏感的药物。结果表明：各药物对MDBK细胞无损伤的最大安全浓度(最低稀释度)分别是利巴韦林(214)、黄芪(25)、鱼腥草(28)、干扰素a2b(25)、莪术油(27)、双黄连粉针剂(27)。药物抗梅花鹿源BVDV作用由强到弱的顺序：莪术油、鱼腥草、黄芪、干扰素、利巴韦林、双黄连。