冰片及配伍对血脑屏障通透性的影响和脑保护作用机制研究

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目的 研究冰片对血脑屏障(BBB)的影响,探讨冰片促进其他物质透过血脑屏障的方式,并研究冰片、冰片与丹参三七水溶性组分配伍对缺血性脑损伤的脑保护作用。方法1. 采用原代培养大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)和星形胶质细胞(AS)共培养方式建立体外BBB模型,以跨内皮细胞电阻(TEER)、γ-谷胺酰胺转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(ALP)活性检测及紧密连接相关蛋白ZO-1蛋白免疫组化染色方法,验证该模型的BBB特征,比较其与单层BMEC模型的差别,应用该模型观察冰片对BBB及丹酚酸B通透性的影响,RT-PCR法检测了冰片及与丹酚酸B对BBB模型编码P-糖蛋白基因Mdr1a、Mdr1b mRNA表达的影响。2. 线栓法复制大鼠MCAO缺血2h再灌注损伤模型,随机分为冰片组、丹参三七合剂组、丹参三七合剂加冰片组和模型组,每组于再灌注后即刻、24h、48h、72h灌胃给药冰片、丹参三七合剂(丹酚酸B与三七总皂苷组分组成)、丹参三七合剂加冰片、溶媒CMC-Na,以正常大鼠为对照组,每组分别于再灌注24h、48h、72h末次给药后处死取材,免疫组化法观察脑组织神经营养因子NGF、BDNF、GDNF、bFGF、VEGF蛋白的表达部位,RT-PCR法检测缺血侧脑组织NGF、BDNF、GDNF、bFGF、VEGFmRNA的表达。结果1. 成功培养了大鼠BMEC,应用细胞共培养池,建立了BMEC和AC两种细胞共培养BBB模型。跨内皮细胞电阻(TEER)、γ-谷胺酰胺转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(ALP)活性检测及紧密连接相关蛋白ZO-1蛋白免疫组化观察表明,该模型基本具备BBB特征,较单层BMEC屏障模型更接近在体状态;2. 5ug/ml冰片作用于BBB模型,60min及24h内TEER值无明显改变,冰片与丹酚酸B共同作用于BBB模型24h,模型Mdr1a mRNA表达明显下调,而二者分别应用时无此作用。3. 在大鼠MCAO再灌注损伤模型,冰片在再灌注72h时可明显使NGF、BDNF、GDNF、bFGF、VEGFmRNA表达上调;与丹参三七配伍屁丽赢蔽中文摘要VEG而RNA结论72h时GDNF、表达上调,并明显抑制再灌注48h时bFGF、BDNF、NGFmRNA表达的下调。·手功建立了由脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养体外血脑屏障模型;冰片对血脑屏障紧密连结无直接开放作用;冰片与丹酚酸B联合应用抑制脑微血管内皮细胞上影响其对药物的外排作用,P一糖蛋白基因表达,可能是其促进其他物质透过血脑屏障的机制之
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