外伤性视神经病变是外力经眶骨传导对视神经的间接损伤，往往导致严重视功能障碍甚至永久失明。视神经是视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell，RGC)轴突汇聚而成，视神经损伤后，RGC将发生继发性死亡。凋亡(apoptosis)是RGC死亡的一种重要形式。视神经损伤后，各种因素可改变神经元生存的微环境，如神经营养因子的剥夺、钙离子超载和过氧化损伤等细胞内连锁反应，启动和诱导神经元凋亡。视神经损伤的治疗首先应是减少视网膜神经节细胞凋亡和死亡，继而促进神经轴突的再生。 大剂量甲基强的松龙(methylprednisolone，MP)治疗急性视神经损伤是借鉴式应用于临床，治疗效果各家报道不一，治疗机制亦不清楚。 本研究拟通过建立视神经损伤动物模型，早期应用大剂量MP郑州大学2002年研究生论文 大剂量甲基强的松龙对大鼠视神经挤压伤后视网膜神经节细胞凋亡的影响治疗，设立对照组观察对RGC凋亡的影响。并进一步探讨大剂量MP影响凋亡的机制。 方法：选用 126只健康 Wistar大鼠，雌雄皆用，体重2002，外眼及眼底检查正常。随机分为门）正常对照组（对照组，18只 3 6眼）即未进行任何处理的健康 Wistar大鼠；Q）损伤组K4只54眼）即单眼视神经损伤后给予生理盐水治疗； 门）MP治疗组（治疗组，54只54眼）即单眼视神经损伤后给予 MP治疗。再按伤后存活时间随机分为 4 d、7 d和 14 d H个时间点，对照组每个时间点各12眼，损伤组和治疗组每个时间点为 18眼。视神经损伤模型制作：于球后 3 mm处用同一无创血管夹夹持视神经 10 S。治疗组于伤后 lh开始MP治疗，首次给予 3 0 mgthg尾静脉注射，6 h以后按 5．4 mg八kg·h）每 6 h给药一次，直到 48 h，总剂量为 246．8 mg／kg。对照组给予相等容量的生理盐水。实验动物在达到预定存活时间后，用4％多聚甲醛活体经左心室灌注，取眼球，制备视网膜铺片和切片，分别行脱氧核昔酸末端转移酶介导的缺口末端标记法kerminal－deoxynucleotldyl transferase mediated DUTP－biotin nick endlabeling，TUPNEL）染色进行凋亡细胞的计数和定位，免疫组织化学3P法）染色检测 hcf二抗凋亡基因和 bax促凋亡基因的表达情况。视网膜铺片用于视网膜阳性细胞的定量检测，视网膜切片用于检测视网膜阳性细胞所在视网膜的层面。光镜下视网膜铺片计数阳性细胞，数据运用重复测量数据方差分析进行统计学处理。 －2．一 结 果 1．TUNEL染色凋亡细胞计数和定位：视网膜切片中显示TUNEL阳性细胞（凋亡细胞）仅见于视网膜神经节细胞层。凋亡细胞呈胞核染色，呈棕黄色，部分可由于核固缩扭曲破裂而失去正常形态，并可见凋亡小体。 对照组铺片和切片中见极少量凋亡细胞，4 d、7 d和 14 d凋亡细胞数分别为 0＊ 个／mm＼ 0．30个／mm年 0．45个／mm乙 损伤组4d、7d、14d凋亡细胞数分别为N．5个／m‘、22．78个／mm厅 5．3 6个／。乙 损伤组 4 d时出现大量凋亡细胞，7 d后达到高峰，14 d时凋亡细胞明显减少。 治疗组 4 d、7 d和 14 d凋亡细胞数分别为 11．44个／mm’、17．84个／mm’和 1．8 8个／mm乙各时间点对照组、损伤组和治疗组两两比较，差异有显著性中＜0刀5人治疗组视神经挤压伤后＊＊C的凋亡显著减少，大剂量MP早期应用能够减少视神经挤压伤后RGC的凋亡。 2．hcf2和 bax基因表达检测：视网膜切片中见阳性细胞仅位于视网膜节细胞层。典型的阳性细胞着色，呈棕黄色颗粒状，也可见于核膜和胞膜。 对照组 bCI－2丫水平表达，4 d、7 d和 14 d阳性细胞数分别为 6．37个／mm’、6．63个／mm‘和 5．77个／mm’。损伤组 4 d、7 d和14 d阳性细胞数分别为 17．38个／mm‘、ZI．54个／。’和 27．64个／＊＊’。治疗组 4 d、7 d和 14 d卜性细胞数分别为 20．88个／mm’、25．70个／mm汗 32．5个／mm＼各时间点对照组、损伤组和治疗组 －3－ 郑州大学2002年研究生论文 大剂量甲基强的松龙对大鼠视神经挤压伤后视网膜神经节细胞凋亡的影响 两两比较，差异有显著性中功刀5人大剂量MP早期应用能明 显提高抗凋亡基因bclZ的表达。 对照组中 bax＊ 水平表达，4 d、7 d和 14 d＊性细胞数分别 为 5．00个／mm‘、5．87个／mm’和 5．67个／mm‘。损伤组 4 d、7 d和 14 dBax卜性细胞数分别为 ZI．44个／mm’，33．50个／mm‘和 32．96 个／mm’。治疗组 4 d、7 d和 14 d阳性细胞数分别为 17．6个am’。 27．66个／mm‘和 26．84个加m’。各时间点对照组、损伤组和治疗 组两两比较，差异有显著性中刃．0引 表明大剂量MP能明显 降低促凋亡基因bax的表达。 结 论 1．大鼠视神经挤压伤后，伤后4大出现视网膜神经节细胞 大量凋亡