论文部分内容阅读
目的:阐明蔓荆子总黄酮有效成分异牡荆素(isovitexin,ISOV)经调控mi R-34a-5p表达相对选择性促进肝癌干样细胞(liver cancer stem-like cells,LCSLCs)凋亡、抑制SK-Hep-1源性LCSLCs的干性。方法:首先,球形成培养法从体外培养SK-Hep-1细胞系获得球细胞(SK-Hep-1 cell line-derived sphere cell,SK-SC)用作SK-Hep-1源性LCSLCs模型。分别利用球形成率测定、琼脂集落形成试验、流式细胞术和RT-q PCR比较分析SK-Hep-1和SK-SC球形成率、琼脂集落形成率、干细胞相关标志物CD44+细胞百分率以及ALDH1、ABCG2和NANOG表达(干性)。分别利用ELISA、流式细胞术和蛋白质印迹比较SK-Hep-1和SK-SC组蛋白/DNA碎片、Sub-G1细胞百分率(细胞凋亡)和Bcl-2、Bax和Mcl-1蛋白表达。RT-q PCR检测L-02细胞、SK-Hep-1细胞和SK-SC mi R-34a-5p mi RNA表达水平。其次,不同浓度的ISOV(1.0、3.0、10.0μM)处理SK-SC 24 h,分析SK-SC干性、细胞凋亡、Bax、Bcl-2、Mcl-1蛋白和mi R-34a-5p表达。其三,分别利用mi R-34a-5p模拟物转染SK-SC或抑制物转染SK-Hep-1细胞操纵mi R-34a-5p表达水平,测定mi R-34a-5p对SK-SC干性、细胞凋亡和Bax、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达的作用。最后,mi R-34a-5p模拟物联合ISOV处理SK-SC或抑制物联合ISOV处理SK-Hep-1细胞,检测mi R-34a-5p表达、SK-SC干性、细胞凋亡和Bax、Bcl-2和Mcl-1表达的变化。结果:与SK-Hep-1细胞相比,SK-SC表现出更强干性和凋亡耐受性,并降低mi R-34a-5p表达。ISOV以剂量依赖方式抑制SK-SC球形成和琼脂集落形成率,减少CD44+细胞百分率以及降低ABCG2、ALDH1和NANOG m RNA水平,同时,上调mi R-34a-5p水平。此外,ISOV上调SK-SC促凋亡蛋白Bax表达、下调抑制凋亡蛋白Bcl-2和Mcl-1表达、促进细胞凋亡。过表达mi R-34a-5p抑制SK-SC干性、调节凋亡相关蛋白表达以促进细胞凋亡。敲低mi R-34a-5p促成SK-Hep-1细胞干性和凋亡耐受。特别重要的是,mi R-34a-5p模拟物增强,而mi R-34a-5p抑制物拮抗ISOV抑制干性和刺激凋亡作用。结论:1.ISOV具有上调mi R-34a-5p表达、相对选择性增加LCSLCs细胞凋亡,减少SK-SC细胞数量,抑制LCSLCs干性作用。2.ISOV至少部分通过上调mi R-34a-5p表达、调控凋亡调节相关蛋白表达、相对选择性增加LCSLCs细胞凋亡,抑制LCSLCs干性。