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本文研究了亚洲玉米螟Ostria furnacalis(Guenee)幼虫体内丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase,MAPK)的功能,进一步探究了 Bt 毒蛋白 Cry1Ab 对亚洲玉米螟MAPK基因及其他免疫和应激相关基因的调控机制。采用RACE方法克隆获得了亚洲玉米螟MAPK基因的cDNA全长序列,对MAPK基因序列进行了生物信息学分析,成功完成MAPK蛋白的可溶原核表达,利用Western blotting验证了目标蛋白,并制备了多克隆抗体,初步进行了 MAPK蛋白的细胞及组织定位。利用亚致死剂量LC30的Bt毒蛋白Cry1Ab喂饲处理了亚洲玉米螟4龄幼虫,利用qRT-PCR技术分析了亚致死剂量Cry 1 Ab-LC30处理对MAPK基因以及其他相关基因转录水平的影响;RNAi技术抑制MAPK基因表达后利用qRT-PCR技术分析MAPK及其他相关基因转录水平的影响;利用亚致死剂量的Cry1Ab-LC30处理亚洲玉米螟4龄幼虫后并对MAP基因进行RNA干扰,分析了MAPK基因及其他相关基因信号通路的调控机制,主要研究结果如下:(1)利用RACE技术克隆并获得了亚洲玉米螟体内MAPK基因全长cDNA序列。序列全长1592bp,开放阅读框(ORF)长度约1095 bp,ATG为起始密码子,TAA为终止密码子,编码364个氨基酸,包括一个65 bp的5’非编码区和一个432 bp的3’非编码区(GenBank登录号为:MF797866)。Of-MAPK的计算分子量约为41.9kDa。在22-355位含有一个S TKC保守结构域,对Of-MAPK进行蛋白结构预测后发现具有13个α螺旋,8个β折叠。Of-MAPK的氨基酸序列与二化螟Chilo suppressalis ERK2、脐橙螟蛾Amyelois transtella MAPK、海波斯莫科马属蛾Hyposmocoma kahamanoa MAPK、大蜡螟 Galleria mellonella MAPK、柑橘凤蝶Papilio xuthus MAPK、棉铃虫Helicoverpa armigera MAPK 高度同源。(2)采用pET-28a表达系统对MAPK基因编码的蛋白进行了原核表达,结果表明:Of-MAPK重组蛋白的分子量大小与预测结果一致,约为41 kDa。pET-28a-Of-MAPK在28℃、0.2 mMIPTG诱导条件下上清中可大量表达MAPK蛋白,并进行了 Western blotting鉴定。多克隆抗体制备完成后,通过FITC标记可明显在血细胞上观察到MAPK蛋白的分布,利用免疫电镜可在幼虫体壁组织中观察到MAPK蛋白颗粒的分布。(3)亚致死浓度Cry1Ab-LC30处理亚洲玉米螟4龄幼虫后,通过qRT-PCR检测了不同时间MAPK及其他相关基因(AKHR、PPO、GSH-Px、Cat及Hsp90)mRNA水平上的表达变化情况;将MAPK成功RNAi后检测了 MAPK及其他相关基因mRNA水平上的表达变化情况;亚致死浓度Cry1Ab-LC30处理后再将MAP RNAi,并检测MAPK及其他相关基因mRNA水平上的表达变化情况。结果表明:Of-MAPK以及Of-Hsp90基因在表达水平上均显著提高;AHK及GSH-Px处理早期会受到影响而显著升高;PPO及Cat表达会受到抑制。亚洲玉米螟4龄幼虫注射MAPK-dsRNA后,MAPK基因表达从12 h至72 h均有明显下调。当MAPK基因被沉默后,AKHR基因表达水平上调,PPO基因在0-48h内下调,随后表达水平升高,GSH-Px以及Cat基因表达在12-24 h受到抑制,随后显著上调,而Hsp90基因表达则表现出受到持续抑制的效果。将亚洲玉米螟4龄幼虫喂饲活化后的Cry1Ab-LC30后再进行M4PK基因的RNAi,结果发现早期MAPK基因与这些基因之间存在一定的相互关联,MAPK基因正调控PPO、Hsp90、GSH-Px及Cat基因,而MAPK基因负调控AHKR基因。