[目的]探究耐药白色念珠菌的生长特性以及81 0nm激光和670nm激光对耐药白色念珠菌的杀菌作用效果,寻找具有杀菌作用的激光能量范围,为临床上安全、有效地使用810nm和670nm激光和光动力治疗相关耐药菌感染类疾病提供参考依据。[方法]1.测量并绘制本实验室适宜念珠菌生长条件下耐药与质控菌株的生长曲线,了解菌株生长特性。2.810nm和670nm激光对白色念珠菌的杀菌作用研究分别取耐药白色念珠菌菌株(代号:TS)和质控白色念珠菌菌株(代号:90028)对数生长期(约OD600=1.5)的菌液接种于沙堡弱琼脂平板,20h后长成菌落。(1)挑取新生的菌落制成1.00(±0.03)麦氏浊度(McF)菌液,96孔板每个孔中加入100ul菌液和75ul生理盐水以及25ulMB,充分混匀,静置5分钟。①使用810nm激光,连续波模式,功率为500mW照射,组1:照射754s(120.06J/cm2);组 2:照射 377s(60.03J/cm2);组 3:照 90s(14.33J/cm2);组4:照射30s(4.78J/c2);组5:对照组,照射Os(0J/cm2);组6:对照组,0s(0J/cm2)无亚甲基蓝(MB);组 7:照射 754s(120.06J/cm2)无 MB。②使用670nm牙周激光治疗仪照射,组1:照射754s;组2:照射377s;组3:照射90s;组4:照射30s;组5:对照组,Os;组6:对照组,0s,无MB;组7:照射90s,无MB;组8:照射754s,无MB。(2)将照射后的菌液每个孔取100ul,均匀涂布于沙堡弱琼脂平板,将其置于恒温箱,20小时后取出计数菌落。3.810nm和670nm激光对白色念珠菌作用的热效应研究:(1)耐药和质控菌株1McF菌液制取方法同前。(2)使用红外测温仪测量上述方法激光照射条件下菌液温度的变化。4.810nm和670nm激光对耐药白色念珠菌耐药性的研究:(1)取上述方法670nm激光以及810nm激光照射菌液后,培养20h生长出的菌落,制取1麦时浊度TS菌液。(2)使用自动加样器在96孔药敏板中各孔加样本100ul,放入37℃孵箱,24h后读取药敏结果。5.810nm和670nm激光对白色念珠菌杀菌作用机制的探讨:取上述810nm和670nm激光照射后的菌液,取50ul涂片,显微镜下观察激光照射前后真菌菌体形态的变化。[结果]1.在本实验条件下,对数生长期耐药菌株生长速度快于质控菌株,领先到达平台期。我们推测在相同生存条件下,耐药菌株的增殖能力更强;2.810nm和670nm激光的杀菌效果:在光敏剂的配合使用条件下,两种激光对白色念珠菌杀菌作用效果随着照射时间的增加显著增强,在照射相同时间条件下,810nm激光杀菌作用效果弱于670nm激光;在无光敏剂配合条件下,810nm激光没有杀菌效果,670nm激光仍然有一定的杀菌效果,但是杀菌效率较低;3.810nm和670nm激光的热效应:810nm和670nm激光直接照射混有光敏剂的菌液,会导致菌液温度的轻度升高,在0-6.5min的照射时间内,温度变化范围在2℃以内;4.两种激光通过不同照射方式都不能改变TS菌株的耐药数值;5.真菌菌体在激光照射后膨胀、裂解,随着照射时间的增加,菌体裂解的数量增多。[全文小结]1.耐药菌株生长速度较快,领先到达平台期;2.810nm和670nm激光的杀菌效果:(1)两种不同的激光对质控或耐药白色念珠菌都具有一定的杀菌作用,相同照射时间,670nm波长激光杀菌效果优于810nm波长激光;(2)照射时间能够明显影响激光杀菌作用效果,呈正相关;(3)光敏剂的配合使用能够明显提升两种波长激光的杀菌作用效率;(4)同一种激光对耐药菌株和质控菌株的杀菌作用效果无明显差异;3.810nm和670nm激光的热效应:两种激光直接照射菌液,会导致菌液温度的轻度升高,在0-6.5min的照射时间内,温度变化在2℃以内;4.两种激光不改变耐药菌株的耐药性;5.真菌菌体在激光照射后膨胀、裂解。