肝癌细胞上清对细粒棘球蚴原头节体外培养活性的影响

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目的:比较三种肝癌细胞上清对体外培养细粒棘球蚴原头节的活性影响。方法;收集培养48 h后的Huh7、Hepa1-6和HepG-2等3种肝癌细胞无血清上清,分别与细粒棘球蚴原头节(每组约5 000个)共培养,对照组只采用无血清培养基培养。培养后第1、3、5、7 d,取各组混悬液50μl进行台盼蓝染色观察、计数并计算存活率;培养后第7 d,于扫描电镜下观察头节微观形态,并用ELISA测定4组细粒棘球蚴半胱氨酸蛋白酶-3酶的活性。结果;台盼蓝染色可见无血清组、Huh7组、Hepa1-6组和HepG-2组原头节在第5 d时存活率下降显著,分别为:46.54%±1.11%、46.19%±3.60%、55.90%±2.33%和68.73%±1.06%;第7 d,Hepa1-6组以及HepG2组头节存活率分别为36.09%±0.95%和45.69%±0.40%,与对照组17.99%±1.52%差异均有统计学意义(P<0.01),Huh7组19.04%与对照组17.99%±1.52%差异没有统计学意义(P>0.05)。第7 d扫描电镜下可见对照组、Huh7组原头节形态大体破坏,微毛、吸盘等超微结构紊乱、崩解,Hepa1-6组、HepG2组虫体表面较为饱满且平滑,超微结构也较为清晰完整。半胱氨酸蛋白酶-3酶的活性检测结果示Hepa1-6组和HepG2组酶活力单位在第7 d分别为20.51±0.61和17.51±0.59,与对照组22.15±1.14相比均有统计学差异(P Hepa1-6<0.05,P HepG2<0.01),Huh7组22.67±0.96相较对照组22.15±1.14在酶活性上不存在统计学差异(P>0.05)。结论;肝癌细胞上清可改善体外培养下细粒棘球蚴原头节活性,并以HepG2细胞上清作用更明显。
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