为结合核移植技术，制备高表达IL-11的转基因山羊乳腺生物反应器，我们开展了胚胎成纤维细胞基因打靶相关研究。首先，用SuperCos1载体构建了山羊基因组粘粒文库，并从中筛选到β-酪蛋白基因；第二，将人IL-11的小基因克隆到β-酪蛋白基因调控序列下游，构建了基因打靶载体pNBCTil-11；第三，用pNBCTil-11载体转染小鼠乳腺癌C127细胞系，氰化可的松、催乳素及胰岛素联合诱导抗G418的细胞，ELISA检测IL-11的表达；最后，用pNBCTil-11转染GEF，在含有G418和GANC的培养液中选择培养，PCR、Southern blot筛选打靶事件。 本实验构建的基因组文库共有3.62×10~5个克隆，阳性克隆率达到97.5％，插入片段大小平均为40kb，并从中克隆到的β-酪蛋白基因及侧翼序列；pNBCTil-11打靶载体经酶切分析、测序以及转染C127细胞后诱导表达，证明了载体是正确、有效的。转染GEF后，共分离到正常抗性克隆136个，3′巢式PCR分析有13个克隆呈阳性，进一步Southern杂交确定了2个克隆为定点整合。 本研究获得了覆盖面达到99％山羊基因组文库，该文库的建立既是开展山羊分子遗传学和基因工程研究的基础，也填补了国内至今无山羊基因文库的空白。本实验成功应用原代成纤维细胞基因打靶技术，首次获得了在β-酪蛋白基因座定点整合IL-11的GEF细胞株，为进一步核移植做好了准备。