目的：A族链球菌（Group A Streptococcus;GAS），又称化脓性链球菌，是一种全球范围内的人类重要致病菌。它能够在人类的鼻咽部、皮肤和肠道组织中持续性存在，引起一系列感染，包括：急性咽炎、脓胞病、中毒性休克综合症、侵袭性筋膜炎、猩红热、肺炎、丹毒和GAS感染后引起的变态反应性疾病，如急性风湿热（ARF）、风湿性心脏病（RHD）、急性肾小球肾炎。GAS的感染在任何年龄段均可发生。特别对患有水痘的儿童，免疫系统被抑制的人群，烧伤的病人，患有蜂窝组织炎、糖尿病、血管疾病、癌症的老年人，接受类固醇药物治疗和化疗的病人具有较大的威胁性。　　 目前倾向于认为GAS是一种胞内侵袭性细菌，能够进入并持续性生存在哺乳动物细胞内。有证据显示，这种胞内侵袭能够帮助GAS抵抗免疫因素和抗生素对其的影响，使得GAS感染频繁发生，这也是GAS能够在宿主体内播散的一个原因。GAS感染宿主的第一步就是黏附在宿主的上皮细胞上。最近的研究结果提示，黏附过程分为2步：第一步由脂磷壁酸(LTA)介导的，GAS克服宿主细胞对其的静电排斥力，表现出一种微弱的、可逆性的黏连。第二步是由组织特异性的M蛋白、F蛋白介导的牢固性的、不可逆性的黏连。FbaA蛋白和M蛋白具有相似的功能，Pandiripally等人的结果显示，FbaA蛋白具有借助补体调节蛋白FH/FHL-1介导GAS进入人类上皮细胞的功能，这意味着该蛋白有助于GAS在宿主细胞内的存活。　　 本室前期实验发现FbaA蛋白具有很强的免疫原性，并且在小鼠体内诱导保护性免疫应答，抵抗了GAS对小鼠的攻击。为了进一步研究FbaA蛋白的生物学功能，并探索GAS的致病机制和感染后的治疗策略，本室制备了抗FbaA蛋白的单克隆抗体—MAb2。前期研究结果显示该抗体与FbaA+GAS菌显示出高亲和力的结合；另外，研究还发现MAb2结合FbaA的表位与补体调节蛋白FH结合FbaA蛋白的结合位点大部分重叠。为了进一步探讨该单抗是否具有抗GAS感染的实用性，本研究将该单抗预先注射小鼠，再以致死量GAS对小鼠进行攻毒，通过小鼠的存活率对FbaA MAb2在体内中和GAS的能力进行评估；并通过免疫荧光实验和侵袭实验对FbaA MAb2能否阻止FH与GAS的结合进行了研究。　　 方法：　　 1.1将本室前期制备的能够稳定分泌FbaA MAb2的杂交瘤A8细胞通过亚克隆、全菌ELISA方法筛选出能够分泌较高抗体滴度的细胞株，接种小鼠腹腔制备腹水。　　 1.2将获得的腹水倍比稀释为1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，加入菌液作试管凝集实验。根据结果选定合适的稀释度免疫动物。　　 1.3单抗被动免疫对小鼠感染GAS的保护作用：将雌性BALB/c，8周龄小鼠，随机分成4组，每组6只，分别为FbaA MAb2原液组、1/2稀释组、1/4稀释组和PBS菌液对照组。将单抗以不同浓度被动免疫小鼠后，用致死量GAS(M+FbaA+)标准菌株(7.5×107)攻击各组小鼠，计算保护率。　　 2.荧光显微镜观察FH对GAS结合单抗的干扰作用：收集培养至对数生长期的FbaA+GAS和FbaA-GAS，调整菌液浓度为108CFU/ml，分别加入l0ug/mlFH室温结合，同时设立PBS对照。将菌液滴到载玻片上固定，再依次加入5ug/ml FbaA MAb2和FITC标记的羊抗鼠IgG二抗，荧光显微镜观察。　　 3.侵袭抑制实验：在以上培养的菌株中依次加入FbaA MAb2，与菌共同作用30分钟后加入FH，同时只加FH无单抗，以及无FH无单抗2个对照组。将预处理的菌复合物加至A549细胞共同培养2小时后，洗去菌液，加入含有l000U/ml青霉素，500U/ml链霉素的培养基中继续培养2小时后裂解细胞，将裂解液接种至链球菌培养固体培养基，37℃过夜培养，次日观察并对菌落计数。　　 结果：　　 1.攻毒5天后，PBS组小鼠全部死亡，各实验组连续观察两周后依然有多只小鼠存活。各组保护率：FbaA MAb2原液组和1/2稀释组均为66.67％，FbaA MAb21/4稀释组为50％。经过SPSS10.0统计软件分析各实验组与PBS组保护率均有显著差异。　　 2.FbaA MAb2与FbaA+GAS能很好的结合，但不能与FbaA-GAS结合。预先加入FH能显著降低FbaA MAb2与FbaA+GAS的结合。　　 3.FbaA+GAS预先与FbaA MAb2作用，就能显著减少FH介导的FbaA+GAS对A549细胞的侵入，表现为此组血平板的菌落形成数明显少于只加入FH组的。　　 结论：　　 1.FbaA MAb2在小鼠体内对GAS有较强的中和能力。因此，FbaAMAb2有望用于紧急预防及治疗GAS感染。　　 2.FH能够影响FbaA MAb2与GAS的结合，支持了FbaA MAb2、FH与GAS表面FbaA蛋白结合位点有重叠的实验结果。　　 3.FbaA MAb2能够竞争性抑制FH与GAS表面FbaA蛋白的结合，减少了FH介导的GAS侵入上皮细胞的数量。