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目的:探讨HER-2阳性乳腺干细胞与乳腺癌耐药的关系,为乳腺癌患者的临床个体化治疗和疾病预后提供实验依据。方法:将HER-2弱阳性的乳腺癌细胞(MDA-MB-468)分为未处理组和紫杉醇处理组,采用低浓度加量持续诱导法获得紫杉醇耐药的乳腺癌细胞(MDA-MB-468/Taxol),MTT方法测定两组细胞的存活率,流式细胞仪检测两组细胞之间的HER-2表达,采用微球体培养法富集乳腺癌微球体,逆转录聚合酶链反应检测两组细胞中癌干性基因Oct4的表达,Aldefluor Assay测定两组细胞中ALDH1的表达。结果:1.经紫杉醇预处理14天后成功获得乳腺癌耐药细胞(MDA-MB-468/Taxol),MTT方法显示同样条件下将两组细胞再次暴露于紫杉醇时,紫杉醇处理组的存活率明显高于未处理组,具有显著统计学差异(p<0.01)。2.流式细胞仪检测出未处理组与不同浓度(2nM、5nM、10nM、20nM、50nM、100nM)紫杉醇处理组的HER-2表达率分别为32.2%、39.4%、51.4%、65.6%和66.7%,呈逐渐升高的趋势。3.细胞悬浮培养7天后,乳腺癌微球体形成,未处理组与不同浓度(5nM、10nM)紫杉醇处理组的微球体细胞数量分别为29个,65个和48个,与未处理组相比,紫杉醇处理组中乳腺癌微球体数目增加,具有统计学差异(p<0.05)。4.逆转录聚合酶链反应结果显示与未处理组相比,紫杉醇处理组中癌干性基因Oct4表达显著增加。5.A1defluor Assay实验显示对照组中未处理组与紫杉醇处理组ALDH1的表达率均为0.1%,而实验组中未处理组与紫杉醇处理组的表达率分别为0.2%和0.6%,表明紫杉醇耐药细胞中乳腺癌干细胞比例增加。结论:1.HER-2高表达的乳腺癌细胞具有紫杉醇耐药性。2.HER-2高表达的乳腺癌耐药细胞具有更高微球体形成能力及干细胞标志物表达能力的癌干细胞样特点,是介导化疗耐药的主要原因。
