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硬蜱（Hard Ticks）是一种专性吸血节肢动物,分布于世界各地,几乎可以寄生于包括人类在内的所有陆栖脊椎动物。硬蜱可携带包括斑点热群立克次体、无形体、埃立克体、贝氏柯克斯体等立克次体,螺旋体、布氏杆菌等细菌,巴贝西虫等原虫以及病毒在内的众多人和/或动物病原体。因此,硬蜱被认为是重要的病原载体。立克次体（Rickettsia）是一类大小介于细菌和病毒间、专性寄生于真核细胞的原核微生物。蜱传立克次体主要有立克次体属（Rickettsia）斑点热群立克次体（Spotted fever group rickettsia,SFGR）、无形体属（Anaplasma）和埃立克体属（Ehrlichia）,分别引起斑点热、无形体病和埃立克体病。贝氏柯克斯体（Coxiella burnetii）虽然已归类到军团菌目（Legionellales）,但其引起的Q热仍归于立克次体病范畴。硬蜱作为立克次体的宿主和传播媒介在立克次体病的流行中起重要作用,研究硬蜱携带病原体对于蜱传疾病的防控具有重要意义。本研究于2019-2020年在我国黑龙江省饶河县、吉林省延边市、内蒙古自治区呼伦贝尔市、山东省青岛市即墨区、安徽省金寨县、湖北省随县和罗田县、西藏自治区察雅县、云南省巍山县及临沧市8省份10地区采集游离及寄生硬蜱共计1,252只。采用形态学和分子生物学方法对蜱种进行了鉴定,采集的蜱种包括我国常见的5个属9个种,分别为革蜱属的森林革蜱（Dermacentor silvarum）、草原革蜱（D.nuttalli）,硬蜱属的全沟硬蜱（Ixodes persuleatus）、巴氏硬蜱（I.pavlovskyi）,血蜱属的嗜群血蜱（Haemaphysalis concinna）、长角血蜱（H.Iongicornis）,璃眼蜱属的伊氏璃眼蜱（Hyalomma isaaci）,扇头蜱属的血红扇头蜱（Rhipicephalus sanguineus）、微小扇头蜱（Rh.microplus）。提取单只蜱全基因组DNA,对DNA样本做宏基因组测序和立克次体属/群特异性PCR扩增,并对扩得基因片段进行测序以确定蜱传立克次体种。通过宏基因组测序对安徽金寨、湖北随县和罗田、吉林延边、内蒙古呼伦贝尔、西藏察雅、黑龙江饶河和山东即墨获得的763只硬蜱携带的立克次体进行了初步分析。结果在属水平发现5种立克次体。不同地区不同蜱种携带立克次体属DNA片段数目存在较大差异,西藏察雅伊氏璃眼蜱体内无形体属DNA片段数目超过12000,柯克斯体属、立克次体属、埃立克体属DNA片段数目均超过2000。不同地区不同蜱种携带立克次体属丰度也存在较大差异,其中西藏察雅伊氏璃眼蜱中柯克斯体属丰度最高,内蒙古呼伦贝尔的草原革蜱和西藏察雅的伊氏璃眼蜱中立克次体属丰度最高,安徽金寨和湖北罗田的长角血蜱和西藏察雅的伊氏璃眼蜱中无形体属丰度最高。采用巢式PCR扩增和扩增阳性片段测序分析检出柯克斯体科（Coxiellaceae）、立克次体科（Rickettsiaceae）及无形体科（Anaplasmataceae）内11种立克次体。其中长角血蜱的柯克斯体共生菌（Coxiella endosymbiont）阳性率为32.46%（112/345）、森林革蜱的柯克斯体共生菌阳性率为53.36%（143/268）、微小扇头蜱的柯克斯体共生菌阳性率为25.28%（43/178）、全沟硬蜱的柯克斯体共生菌（Coxiellaceae bacterium RFE03）阳性率1.22%（3/245）、贝氏柯克斯体（C.burnetii）阳性率为4.13%（18/436）,斑点热群立克次体中的劳氏立克次体（Rickettsia raoultii）阳性率为30.21%（100/331）、新塔拉萨维奇立克次体（Candidatus R.tarasevichiae）阳性率为9.60%（34/354）、埃氏立克次体（R.aeschlimannii）阳性率为92.86%（13/14）、日本立克次体（R.japonica）阳性率为24.81%（128/516）,无形体属中的蒙古无形体（Anaplasma sp.Mongolia）阳性率为25.71%（63/245）、边缘无形体（A.marginale）阳性率为13.19%（68/516）。共有138只蜱检测出立克次体混合感染,阳性率11.02%（138/1252）,云南临沧硬蜱存在两种立克次体感染,内蒙古呼伦贝尔和云南巍山硬蜱存在两种和三种立克次体混合感染。最后,通过将云南临沧微小扇头蜱匀浆接种鸡胚,成功卵黄囊膜检出贝氏柯克斯体,暂命名C.burnetii Lincang strain,多位点可变数目串联重复序列分析（Multiple Locus Variable-number tandem repeat Analysis,MLVA）分型方法得到Lincang strain编号为9-27-4-6-9-5。综上所述,不同地区不同蜱种体内立克次体属丰度存在较大差异,我国多地硬蜱存在立克次体感染和混合感染,本研究从云南临沧捕获的微小扇头蜱体内检测出一株贝氏柯克斯体。研究为进一步掌握我国部分地区硬蜱携带立克次体的背景资料提供了数据参考,为当地立克次体病的防控提供理论依据。