β—葡萄糖苷酶是纤维素酶系中的一种，是纤维素降解的限速酶。因此，通过构建基因工程菌以促进β—葡萄糖苷酶的表达，是实现纤维素高效降解的有用途径。构建未培养细菌的宏基因组文库是新兴的筛选新型基因的有效方法。在本研究中，我们采用β—葡萄糖苷酶活性筛选策略，从未培养碱性污染物宏基因组AL01文库中筛选到3个编号分别为pGXAG142、pGXAG313和pGXAG805的阳性克隆。对它们进行DNA测序后进行了生物信息学分析。结果显示，这3个克隆的外源片段分别包含有783 bp、510 bp和1443bp的ORF，分别编码281、170、481个氨基酸组成的蛋白质，pI／Mw分别为4.88／29079.25kDa、6.28／18513.32 kDa、5.16／57383.4 kDa。BLAST软件分析这3个基因与现有数据库中的β—葡萄糖苷酶基因没有任何DNA或者氨基酸水平的同源性，可能是新型的β—葡萄糖苷酶编码基因。PCR扩增这3个基因的ORF后将它们分别亚克隆到表达载体pETBlue-2上，然后转化至E．Coli Rosetta（DE3）plysS，平板酶活检测显示它们仍能降解底物，说明均携带了正确的读码框架。我们以大肠杆菌表达菌株pGXAG142G／Rosetta（DE3）plysS的表达蛋白Bglg142为主要研究对象，对其进行了酶学性质的初步研究，发现该酶的最适pH为5.5-8.0，最佳作用温度为50℃，Km值为0.238 mmol·L^-1，Vmax为10.6 U·min^-1，最适条件下酶活为24.8 U·ml¹。K⁺、Mg²⁺、Zn²⁺对酶反应有激活作用，Ca²⁺、Co²⁺、Cu²⁺、Ba²⁺则抑制酶活。HPLC产物分析结果确证Bglg142编码蛋白为β—葡萄糖苷酶。本研究所阐述的3个新型β—葡萄糖苷酶是采用未培养方法获取的，为该方法发现新基因的有效性提供了又一个有力的依据。