克罗诺杆菌感染婴幼儿可引起数种重症疾病,如新生儿脑膜炎、小肠结肠炎及菌血症等,感染致死率高达50%以上。近年来,全球范围内婴幼儿感染克罗诺杆菌事件屡见不鲜,虽尚未确定该菌的宿主与传播模型,但就目前多数病例报告而言,主要感染渠道指向婴儿配方食品。因此,如何杜绝克罗诺杆菌污染婴幼儿配方食品对保护婴幼儿身心健康是至关重要的。本次研究对陕西境内不同规模的、具有代表性的4家婴幼儿配方羊乳粉加工企业进行为期长达60周的生产产品、设备、环境、器具及人员的采样,旨在调查婴幼儿配方羊乳粉生产过程中各环节的克罗诺杆菌污染状况。并对分离株进行分子分型以推断克罗诺杆菌在工厂内的潜在污染途径,结合克罗诺杆菌污染特点进行防控技术研究,为婴幼儿配方羊乳粉加工企业提供技术支撑,得到主要结论如下:(1)4家婴幼儿配方羊乳粉加工企业依采样计划共采集样品1560份,其中阳性样品48份(占比3.1%),涉及采样点134个,阳性点33个(24.6%)。A、B、C、D四厂克罗诺杆菌检出率分别为16.0%(24/150)、1.0%(5/510)、1.0%(4/408)、3.0%(15/492),采样点阳性率分别为52.0%(13/25)、14.7%(5/34)、11.8%(4/34)、26.8%(11/41)。(2)分项调查表明:(1)车间污染率最高的为空气过滤系统4.8%,其次为内包车间3.8%、流化床车间3.5%;(2)不同状态样品污染率最高为空气样6.6%,其次为棉签涂抹样3.1%、粉末样1.7%、液体样0.7%;(3)空气样中内包车间及浓缩车间污染率最高,均为8.9%,棉签涂抹样中喷雾干燥车间污染率最高4.2%。粉末样中“中间粉”污染率最高4.4%,液体样品仅在浓缩乳中检出,污染率为2.2%。(3)试验设计了克罗诺杆菌属内7个种的特异性引物,通过普通PCR方法对分离的疑似克罗诺杆菌进行鉴定,结果显示48株均为阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii),高达100%。其余六种C.malonaticus、C.turicensis、C.dublinensis、C.muytjensii、C.universalis和C.condiment均未检出。(4)检出的48株阪崎克罗诺杆菌可分为15个型,其中35株(72.9%)分布于Y1-Y5五大分型中。Y5型中7株菌3株来自B厂,4株来自C厂,藉此判定分离株中分子分型发生交叉,其余两厂未出现分型交叉现象。污染途径分析表明:Y1是主体污染菌株,Y1型—由员工将浓缩车间空气中的该菌带入洁净作业区,从而污染了中间粉及未包装成品粉。Y2型—由空气过滤系统带入洁净作业区,成品粉中未检出,表明在后续工序中被杀死;Y3型—由员工带入洁净作业区,成品粉中未检出;Y4型—由员工或空气过滤系统带入洁净工作区,造成局部污染,但成品粉中未检出。(5)不同稀释倍数乳酸熏蒸对空气的杀菌效率研究表明:5倍稀释(92.10%)>10倍稀释(85.42%)>原液(77.14%),差异显著(P<0.05)。不同稀释倍数乳酸熏蒸对阪崎克罗诺杆菌的杀菌效率研究表明:5倍稀释(88.89%)>10倍稀释(83.33%)>原液(76.19%),差异显著(P<0.05)。二者杀菌率趋势相同,因此5倍稀释乳酸熏蒸效果佳。车间空气紫外杀菌试验表明:照射30min,杀灭率仅为46.16%,照射60min,杀灭率上升至62.61%,杀菌效果不佳。器具表面杀菌试验表明:紫外照射10min阪崎克罗诺杆菌全部失活,杀灭率为100%。因此,紫外照射作为表面杀菌效果佳。综上,生产环节阪崎克罗诺杆菌有效防控须综合考虑“人、机、料、法、环”各个方面多技术手段并举。