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实验目的了解2009-2010年度兰州地区急性呼吸道感染(ARTIs)患儿中呼吸道相关病原谱的流行现状,重点监测人偏肺病毒、人博卡病毒、肺炎支原体,为本地区儿童急性呼吸道感染相关病原的流行病学研究积累数据,为临床抗感染治疗提供依据。同时开展荧光定量PCR法在呼吸道病原体检测中的应用。对象及方法1收集2009年12月至2010年11月在兰州大学第一医院儿科确诊为急性呼吸道感染的门诊和住院患儿的鼻咽分泌物(Nasopharyngea aspirates, NPAs)和咽拭子(throat swabs)标本。2采用荧光定量RT-PCR法检测人偏肺病毒,巢氏PCR法检测人博卡病毒,同时用普通PCR方法检测10种呼吸道感染相关病毒：ADV、RSV、IFV(A、B型),HRV、PIV(1-3型)、HCOV-NL63、HCOV-HKU1,并对其进行测序和系统进化分析。结合本连续性研究4年间资料,分析相关病毒流行趋势。3用荧光定量PCR法检测鼻咽分泌物标本中肺炎支原体并分析临床资料,了解其在兰州地区的感染情况和流行规律。同时对比检测南京地区肺炎支原体感染情况,初步了解我国东西部地区肺炎支原体感染的流行病学差异。结果1本研究用Real-time RT-PCR检出人偏肺病毒阳性标本54例,检出率9.91%,在本年度呼吸道感染相关病毒中位居第四位。病毒载量分析后平均病毒载量是4.88×109拷贝/ml,106拷贝/ml及以上人数占72.22%。阳性标本对M基因分型后21例(38.89%)分出型别,系统进化分析后显示本年度以A2b型为优势型别(47.62%)。在流行病学方面,HMPV在男女性别检出无差异,时间上以3-5月检出率较高；年龄分布上以1岁以下患儿检出数最多；2岁以上患儿检出率有下降趋势。HMPV的病毒混合感染率为57.41%,最常见混合感染病毒为RSV(38.71%)和PIV3(35.48%)。HMPV在上下呼吸道感染中的检出率无差异。阳性患儿更易出现喘息症状。2.545份标本中共检出人博卡病毒45例,检出率8.26%,其中HBoV1型41例HBoV2型3例,HBoV3型1例,检出率分别为7.52%、0.55%、0.18%,未检出HBoV4型。其中HBoV1型男女性别检出率之间差异无统计学意义；夏季(7～8月)、冬季(1月、11～12月)检出率较高,检出高峰在7月,检出率为14.29%；年龄分布方面,1岁以下患儿检出24例,检出率8.63%,检出数和检出率均居首位。有较高的混合感染率(65.85%)。HBoV1型在下呼吸道感染患儿中检出率为9.14%(33/361),显著高于上呼吸道感染患儿的检出率4.35%(8/184)(χ2=4.025,P=0.045<0.05)。HBoV1单一感染患儿与混合感染患儿临床表现之间比较差异无统计学意义。HBoV2型、3型均为混合感染。3例人博卡病毒2型阳性患儿均出现腹泻症状。3.本年度呼吸道标本病毒检出率为62.94%(343/545)。检出率排在前三位的是HRV (108,19.82%)、RSV (106,19.45%)、PIV3 (66,12.11%)。病毒检出在性别和季节分布上比较差异无统计学意义；在年龄分布上,7～12月龄患儿检出率最高(70.84%),3岁以上患儿病毒检出率有下降趋势。4通过对四个研究年度呼吸道相关病毒检出及流行情况进行比较,发现如下流行趋势：(1)在前三个研究年度,RSV一直是检出率最高的病毒,HRV居第二位；在本年度HRV跃居为检出率最高的病毒,RSV居于第二位,且HRV在四年中本年度检出率最高。(2)四年来,流感病毒B型检出率从1.50%→2.70%→4.90%→5.14%。其发病率有逐年上升趋势。(3)副流感病毒1-2型近四年几乎未检出；3型是兰州地区流行的主要和常见亚型,且近两年检出率有增高趋势。(4)冠状病毒HKU1在近两年的发病率分别为0.40%(2008.12～2009.11)、0.37%(2009.12～2010.11),较前两年度的发病率3.00%(2006.12～2007.11)、4.30%(2007.12～2008.11)明显减少(χ2=25.224,P<0.01)。5兰州地区检出肺炎支原体检出率10.51%(39/371),显著低于南京地区检出率22.20%(95//428)(χ2=19.437,P<0.01)。兰州地区肺炎支原体的平均拷贝数为4.21×108拷贝/ml,南京地区为3.01×107拷贝/ml；南京地区106拷贝/ml及以下人数比例明显高于兰州地区(χ2=7.724,P=0.005<0.01)。在时间分布上,两地检出高峰季节无差异,均在夏秋季节；在年龄分布上,两地区肺炎支原体均占5岁以上急性呼吸道感染患儿病原体的60%以上；南京地区1岁以下年龄段阳性率显著高于兰州地区该年龄段阳性率(χ2=26.558,P<0.01)。在临床诊断上,两地阳性患儿主要诊断均为下呼吸道感染。结论1人偏肺病毒在本年度呼吸道感染相关病毒中检出率位居第四位。本年度以A2b型为优势型别,有B1、B2型流行；且近四年来A2b型一直是优势流行型别。HMPV具有明显的季节分布特征,以3-5月检出率较高。2 HBoV1-3(?)型在兰州地区有流行,未检出HBoV4型,呼吸道感染中以HBoV1型为主(7.53%),且主要与儿童下呼吸道感染相关。首次在我国检出并报道HBoV3型。HBoV与其他呼吸道病毒有较高的混合感染率3在本年度病毒病原在兰州地区儿童呼吸道感染中仍占重要地位；检出率排前三位的是HRV、RSV、PIV3。本年度RSV检出率较前三年明显减低,HRV取代RSV跃居为检出率最高的病毒。4肺炎支原体是引起兰州地区儿童下呼吸道感染的重要病原,有较高的混合感染率。兰州地区检出率显著低于南京地区。两地区在时间分布上均以夏秋、初冬季节(7～11月)检出率较高；年龄分布上,南京地区年龄的低龄化的趋势体现更明显。对阳性标本定量后发现,南京地区低拷贝人数比例明显多于兰州地区。