16S rDNA高通量测序分析滴虫性阴道炎患者阴道菌群多样性

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目的滴虫性阴道炎是由阴道毛滴虫引起的一种常见的阴道炎症。滴虫性阴道炎与阴道菌群的联系是明确该病发病机制和阴道菌群变化不可或缺的部分。本研究以滴虫性阴道炎患者为研究对象,观察该病状态下的阴道微生态特征,并同时利用高通量测序技术分析滴虫性阴道炎患者阴道微生物群落的组成与结构,以期为滴虫性阴道炎的发病机制及其与阴道菌群的关系的进一步研究奠定基础。方法2016年3月至2016年9月于青岛大学附属青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属青岛市立医院,严格按照疾病诊断和研究对象筛选标准,收集育龄期健康妇女和滴虫性阴道炎患者阴道分泌物样本,分别为对照组和滴虫组。测定滴虫组和对照组阴道分泌物p H值。利用革兰染色阴道分泌物涂片比较两组阴道分泌物菌群多样性、乳酸杆菌密集度,评价两组阴道微生态状况。使用乳酸杆菌选择性培养基分离培养滴虫组和对照组阴道分泌物中乳酸杆菌并进行菌落计数。提取阴道细菌总基因组DNA,利用通用引物分别扩增滴虫组和对照组阴道细菌16S r DNA V3和V4高变区。PCR扩增产物经Illumina-Misq高通量测序平台测序,测序长度为450 bp。优化处理序列数据,以97%的相似性阈值划分分类操作单元,进行生物信息学分析,比较两组的菌属构成、Alpha多样性、Beta多样性,寻找组间差异物种。结果滴虫性阴道炎患者阴道分泌物pH值高于对照组,阴道菌群多样性增加、乳酸杆菌密集度显著降低、菌落计数显著低于对照组。滴虫组的阴道分泌物p H值为5.45±0.61,对照组为4.47±0.44,两组差异有统计学意义(p<0.001)。两组分泌物中的乳酸杆菌含量存在较大差异,滴虫组的阴道乳酸杆菌计数为3.83±2.50×106,对照组为16.11±5.24×106,差异有统计学意义(p<0.001)。Alpha多样性分析,两组的多样性指数中OTU个数、Chao1指数、Simpson指数、Shannon指数没有显著差异(p>0.001),滴虫感染时阴道菌群α多样性无显著变化。高通量测序分析发现两组菌群构成在属水平存在显著差异。两组菌群组成差异菌属包括纤毛菌属、普雷沃菌属、乳杆菌属、支原体属、阿波罗菌属、巨球菌属等。结论滴虫性阴道炎患者阴道微环境中菌群多样性增加,乳酸杆菌减少、杂菌增加。高通量测序表明,滴虫性阴道炎患者的阴道菌群多样性与对照组健康女性阴道菌群组成具有一定的相似性,但滴虫性阴道炎患者阴道菌群结构发生变化,乳酸菌属减少,纤毛菌属、普雷沃菌属等其他厌氧菌增多。乳酸杆菌与阴道微生态健康密切相关。高通量测序法与传统的菌群分析法相比,能更精确地反应阴道菌群的结构组成及变化,并能为进一步研究女性阴道滴虫感染机制与防治奠定基础。
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