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研究目的研究不同宫颈病变阶段HPV DNA.mRNA和E6癌蛋白的变化趋势和相关关系,阐述同一人群中HPV病毒DNA载量、mRNA和E6癌蛋白与宫颈癌及癌前病变的关系。材料和方法收集了2010年至2015年正在中国医学科学院肿瘤医院进行的4项研究的标本,采用cobas 4800 HPV检测HPV DNA口梯度稀释的质粒标准品,并根据质粒标准品结果绘制标准曲线,计算每例样本中的病毒载量。采用OncoE6试剂盒半定量检测标本中的E6癌蛋白含量,Aptima HPV试剂盒检测标本中HPV mRNA的表达情况。分析不同病理级别患者中HPV DNA载量、mRNA和E6癌蛋白的表达情况和相关关系。研究结果1.全部14种HR-HPV DNA总载量随病理级别的升高呈明显上升趋势(r=0.328,P<0.001),尤其以HPV16上升趋势最为明显(r=:0.367,P<0.001):HPV18 DNA载量在HSIL患者中DNA载量明显低于SCC患者(LSD检验：tHSIL.scc=0.545,P=0.039)；其他12种HR-HPV DNA载量之和在宫颈正常妇女中较低,而在LSIL和HSIL患者中显著上升(LSD检验：t正常-LSIL=0.937,P<0.001;t正常.HSIL=0.954,P<0.001),但在SCC患者中明显下降(LSD检验：t scc-LSIL=0.708,P<0.001；t SCC.HSIL=0.725,P<0.001).2.HPV16 E6癌蛋白阳性率由宫颈正常妇女中的1.4%上升至SCC患者中的72.8%(χ2=840.970,P<0.001)；各病理级别HPV18 E6癌蛋白阳性率均低于HPV16,但随着病理级别增加仍呈上升趋势,由宫颈正常妇女中的0.8%上升至SCC患者中的12.3%(X2=99.906,P<0.001),且在ADC患者中明显增加(27.5%).HPV mRNA阳性率在宫颈正常妇女、LSIL.HSIL.SCC和ADC患者的阳性率分别为33.3%,41.7%,75.0%,96.4%和73.0%。随着病理级别增加mRNA阳性率显著上升,由宫颈正常妇女至SCC患者阳性率上升明显(X2=109.638,P<0.001).3.HPV16 DNA阴性妇女E6癌蛋白阳性率为1.7%,Ql为43.7%,Q2为79.8%,Q3为87.7%,Q4为94.5%,趋势具有统计学差异(X2=833.201,Ptrend<0.001).随着HPV18 DNA的增加,HPV18 E6癌蛋白阳性率也呈上升趋势,从DNA阴性妇女至Q4分别为1.6%,33.3%,66.7%,73.3%和87.5%,趋势具有统计学差异(X2=567.758, Ptrend＜0.001)。4.在HPV16/18单一感染的妇女中,81.06% SCC患者的DNA和E6癌蛋白均阳性,远高于仅DNA阳性者的7.91%和仅E6癌蛋白阳性患者的0.96%。在HPV16/18多重感染者中,任意型别DNA和E6癌蛋白均阳性者占所有SCC患者的6.48%,而仅DNA或仅E6癌蛋白阳性者仅为0.48%。相反,在宫颈正常的妇女中,仅HPVDNA阳性者占所有宫颈正常妇女的6.16%,远高于DNA和E6癌蛋白均阳性者的1.07%和仅E6癌蛋白阳性者的0.40%,表明]HPV DNA检测的假阳性率较高,提示HPV DNA检测和E6癌蛋白检测可以用于宫颈癌及癌前病变的联合筛查,可减少近采用HPV DNA检测时的假阳性率。研究结论1.不同型别的HPV DNA载量随着宫颈病变程度加重有不同的变化趋势。HPV16DNA载量随着宫颈病变程度加重而增加；HPV18 DNA载量随着宫颈病变加重呈“V”形趋势；其他12种HR-HPV DNA载量之和在宫颈正常妇女中较低,而在LSIL 和 HSIL患者中显著上升,在SCC患者中明显下降,呈“Λ”形趋势。2. HPV mRNA阳性率随着宫颈病变程度加重呈上升趋势。3.随着病理级别的增加,HPV DNA载量和E6癌蛋白阳性率表现出相似的波动性：HPV16 DNA载量和E6癌蛋白信号强度都随着病理级别的增加而增加：而HPV18 DNA载量和E6癌蛋白由LSIL经HSIL进展至SCC表现出先下降后上升的“V”型趋势。4. HPV DNA和E6癌蛋白有较强的相关关系,高病毒DNA载量的妇女有较高的E6蛋白阳性率和较强的E6蛋白信号强度。5.可以结合HPV DNA、mRNA口E6癌蛋白在不同宫颈病变阶段的表达特点,针对不同的目标人群选择相应的检测方法,有助于对疾病进行早期诊断和早期干预,从而减少癌症的发生。