组成型启动子如CaMV(花椰菜花叶病毒)35S 启动子和Ubiquitin(泛素)启动子,在转基因植物的研究中得到了广泛运用。由于组成型启动子不能从时间和空间上有效地调控目的基因的表达,在作物的遗传改良中存在一定的缺陷。组织特异启动子作为一类专一性启动子,能指导外源基因在植物发育过程中某一特定时空表达,它不仅能使目的基因的表达产物在一定空间积累,增加区域表达量,而且也避免了植物营养的浪费。因此,寻找专一性启动子,使外源基因特异、高效的表达已成为植物基因工程的关键环节。PNZIP 是我们从短日照植物裂叶牵牛中分离出来的一个基因,它编码一种含有碱性亮氨酸拉链的蛋白质,原位杂交发现该基因在叶肉中高效表达,而在非光合组织中不表达。因此,为了分离具有自主产权的叶片特异启动子,我们用接头PCR 的方法克隆了长度为1415bp 的PNZIP 启动子并将其与GUS 基因融合,然后对PNZIP 启动子进行了组织表达分析、5′端缺失分析、3′端缺失分析,同时利用酵母单杂交的技术分离了一个可以和该启动子结合的转录因子,并对该转录因子进行了表达分析以及体内、体外功能分析,主要结果如下: 1. 根据PNZIP 基因编码区的上游序列,设计专一引物,利用接头PCR 的方法,从裂叶牵牛中克隆了长度为1415bp 的PNZIP 启动子,基因银行的注册号为AF373414。引物延伸实验证明PNZIP 基因的转录起始位点位于翻译起始位点上游122bp 处,对应启动子序列5′-ACAGTACACTCTAC-3′中的第4 个A,转录起始位点在PNZIP 启动子TATA-box 下游30bp 处,不仅符合真核生物转录起始位点的位置特征,同时也符合Breathnach 提出的真核生物基因转录起始位点邻近序列的一般规律。