中药国产血竭的质量控制研究

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中药国产血竭主要为百合科植物剑叶龙血树Dracaena cochinchinenesis. (Lour.) S.C.Chen 的含脂树皮和木质部提取而得。本课题研究了不同提取工艺对血竭的质量影响,将四种提取方法(回流、索氏、超声、低温膨化)所得到的血竭与市售的传统提取工艺所得到的云南血竭和海南血竭进行比较,采用薄层色谱方法、紫外-可见光谱扫描方法对各种工艺提取的国产血竭进行定性分析和用HPLC方法测定指标性成分龙血素B的含量,从而对不同提取工艺的国产血竭进行定量分析。从定性分析的结果可以得出,各提取工艺除了产率不同外,对血竭质量影响不大,其定性指标基本相同,只有龙血素C的含量有一定的差别。从龙血素B的含量上分析,其含量均未达到国产血竭质量标准所规定的含量,比较结果来看,回流提取、索氏提取及低温膨化提取的国产血竭龙血素B的含量相对较高,而超声提取的国产血竭的含量相对较低。较新的提取方法—低温膨化提取方法所提取的国产血竭与传统提取方法所提取的国产血竭相比,其质量上未见比较显著的优点,虽然其粉末的疏松度比较好,但考虑其稳定性不如其他方法所提取的国产血竭,而且提取成本较高,可以得出此种方法不适合国产血竭的提取。超声提取因其提取得率较低,而且提取所得的国产血竭中龙血素B的含量相对较低,可以认为该方法提取国产血竭的效率较低,浪费宝贵的龙血树资源,因此不适合国产血竭的提取。而应用已久的传统工艺提取国产血竭,从本文的分析来看,是有一定科学依据的。在进行提取工艺比较的过程中,发现原有的质量控制标准中存在一定的问题,在指标性成分龙血素B的近旁有一个很大的杂质峰,严重干扰龙血素B的含量测定,这在以往的文献中未见报道。为了进一步确证上面的发现,又对市售五种品牌的国产血竭进行分析,结果在每一种品牌中均有上述问题存在。因此有必要将此问题研究清楚,深入研究龙血素B旁的干扰峰,对干扰峰所对应的化合物进行植物化学分离鉴定工作,确证其化学结构为龙血素A,它与龙血素B结构非常相近,用较低柱效的色谱柱很难分开。由此推断以往进行龙血素B的含量测定实际上是将龙血素B和龙血素A混在一起作为龙血素B来定量的,因此造成龙血素B的含量相对较高的假象。进一步优化分离条件,在普遍实用的条件下,可以将龙血素A和龙血素B进行基线分离,直接对龙血素A和龙血素B的含量进行分别测定,结果发现所<WP=6>有市售各品牌的国产血竭样品中龙血素B的含量均低于部颁标准,进一步验证上述判断。因此,有必要对现行国产血竭的质量控制标准进行修订。在含量测定中还发现龙血素A的含量比龙血素B的含量高5倍左右,如果龙血素A和龙血素B的药理活性相当,用龙血素A作为国产血竭的指标性成分将更有优势,杂质干扰较轻,便于含量测定。我们又对龙血素A和龙血素B含量进行相关性分析,结果二者的相关性非常好,因此用龙血素A的含量可以在一定程度上反映龙血素B的含量,所以在一般的质量控制中,可用龙血素A含量作为定量指标来控制国产血竭的质量。同时还对国产血竭石油醚提取部分进行了GC-MS分析,基本搞清其成分主要为芳香族化合物和脂肪酸类化合物,其中脂肪酸多为不饱和脂肪酸。在国产血竭石油醚提取物中不饱和脂肪酸的含量在30%左右,根据文献报道,不饱和脂肪酸的药理活性为降血脂和抗肿瘤作用,但国产血竭石油醚提取物中不饱和脂肪酸的药理作用有待于进一步的研究。为了进一步揭示国产血竭的活性部位及药理作用,又进行植物化学分离研究及药理活性研究,经过植物化学分离我们得到国产血竭中两个较大的部位,乙酸乙酯部位和正丁醇部位,采用较为成熟的药理模型,对国产血竭、乙酸乙酯部位及正丁醇部位进行了抗炎、止血活血、抗真菌等药理研究,结果发现国产血竭中的正丁醇部位的药理活性较强,尤其是体外止血活性,体内活血化瘀活性,可以针对这一实验结果,进一步开发应用国产血竭。对国产血竭市售各品牌的药品粉末进行了近红外光谱聚类分析,结果发现,来源于剑叶龙血树的云南血竭和广西血竭与来源于小花龙血树的海南血竭有较大的差异,而来源于剑叶龙血树的各品牌国产血竭之间没有显著的差异。研究结果显示,利用近红外光谱聚类分析方法鉴别国产血竭有一定的实际应用价值。为鉴别国产血竭及进口血竭,本课题又采用较为简便的紫外光谱扫描的方法,通过提取图谱中的特征值,可以很容易的区分出国产血竭和进口血竭。又通过对特征值的聚类分析,可以鉴别出基源植物不同的两类国产血竭,其中一类为来源于剑叶龙血树的云南血竭和广西血竭,而另一类来源于小花龙血树的海南血竭。为进一步应用此鉴别方法,本文又对国产血竭的两类进行了判别分析,拟合出判别方程,为国产血竭的鉴别提供了简便而可靠的方法。总之,本课题对国产血竭做了进一步的研究,基本弄清楚国产血竭中质量控制中存在的一些问题,并探讨了一些较先进的定性定量分析方法,但国产血竭<WP=7>的研究还有许多工作要做,需要进一步搞清楚国产血竭中的活性成分,开发出具有毒性低、疗效好的一类、二类新药,充分挖掘国产血竭这一宝贵资源的潜力。
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