【摘 要】
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缙云黄芩(Scutellaria tsinyunensis C.Y.Wu et S.Chow)作为重庆市特有珍稀濒危植物,其居群及个体数量在不断减少,自然更新存在障碍,野外生存状况极度堪忧。自然条件下,缙云黄芩存在有性生殖障碍,所以无性繁殖成为野外居群的主要繁殖方式,但又受到化感自毒作用等多种因素的制约,导致其无性繁殖也受到抑制。因此,只有通过人工繁殖方式增加个体数量、扩大居群范围以及研究化感自毒
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缙云黄芩(Scutellaria tsinyunensis C.Y.Wu et S.Chow)作为重庆市特有珍稀濒危植物,其居群及个体数量在不断减少,自然更新存在障碍,野外生存状况极度堪忧。自然条件下,缙云黄芩存在有性生殖障碍,所以无性繁殖成为野外居群的主要繁殖方式,但又受到化感自毒作用等多种因素的制约,导致其无性繁殖也受到抑制。因此,只有通过人工繁殖方式增加个体数量、扩大居群范围以及研究化感自毒作用对缙云黄芩的制约机制,才能缓解缙云黄芩的濒危现状,提出有效的保护对策。而人工繁殖中扦插繁殖的方式对缙云黄芩原生居群的损伤较大,同时无法为化感自毒作用的研究提供大量且相同的实验材料,故只有选择组织培养的人工繁殖方式才能彻底解决以上问题。因此,本文的主要难点在于对缙云黄芩组织培养体系的建立以及化感自毒作用的研究,综合分析潜在的濒危机制、提出针对性的保护对策。本文以野生缙云黄芩为材料,通过探究缙云黄芩的丛芽诱导、继代增殖、诱导生根和炼苗移栽条件,建立了缙云黄芩的离体快繁体系;以缙云黄芩组培苗为材料,通过筛选不同培养基对缙云黄芩茎段脱分化的影响、不同外植体对缙云黄芩愈伤组织形成的影响以及植物生长调节剂对缙云黄芩茎段脱分化的影响,初步建立了缙云黄芩的再生体系;以组织培养研究中的组培苗为材料,通过探究缙云黄芩的茎、叶水提液和组培苗根系分泌物对缙云黄芩组培苗生长和生理活性的影响,对缙云黄芩的化感自毒作用进行了研究。主要结论如下:(1)缙云黄芩丛芽诱导及继代繁殖最佳培养基为MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA,丛芽诱导率达100%,培养30 d后的繁殖系数高达9.55,连续4代继代增殖培养的平均繁殖系数为9.11;最佳诱导不定芽生根培养基为1/2MS+0.1 mg·L-1IBA+0.1 mg·L-1 NAA,生根率达100.00%,根数达24.92,根长达3.11 cm;试管苗经炼苗后移栽,30d存活59株,成活率达98.33%。(2)MS培养基最适合诱导缙云黄芩茎段的脱分化,诱导率较高,达76.67%;茎段的脱分化效果最佳,诱导率为86.67%;MS+1.0 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA为诱导缙云黄芩茎段脱分化的最佳培养基,愈伤诱导率达89.58%,产生的愈伤组织能在丛芽诱导培养基(MS+0.5 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 NAA)中分化出芽。(3)不同浓度缙云黄芩茎、叶水提液处理缙云黄芩组培苗,组培苗的生长受到明显抑制,阻碍根系生长;组培苗的株高、根长、株鲜重和根鲜重受到化感抑制作用,均低于对照组;组培苗的MDA含量增加,化感效应体现为促进作用,可溶性蛋白含量降低体现为化感抑制作用;组培苗的POD和SOD活性呈先升高后下降的趋势。总体来说,缙云黄芩茎、叶水提液对缙云黄芩组培苗有化感自毒效应,且茎水提液处理比叶水提液处理对组培苗的抑制作用更强。(4)不同浓度缙云黄芩组培苗根系分泌物处理缙云黄芩组培苗,组培苗生长缓慢,根系生长受到抑制;组培苗的株高、根长、株鲜重和根鲜重均减少,对根长的抑制作用最强烈,体现为化感抑制作用;缙云黄芩组培苗的MDA含量逐渐增加,化感效应体现为促进作用;可溶性蛋白含量逐渐降低,体现为化感抑制作用;组培苗的POD和SOD活性呈先升高后下降的趋势,但均高于对照组,化感效应体现为促进作用。综上,缙云黄芩组培苗根系分泌物对缙云黄芩组培苗有化感自毒效应。结合前人研究,综合分析本实验的研究结果可知,缙云黄芩的濒危机制是由于化感自毒作用的种内竞争、自然坐果率低的繁育特点、小坚果萌发率低的种子特性、相互隔离的“岛屿状”分布现状、伴生植物的种间竞争以及人类活动干扰等因素共同作用的结果。对此,提出对缙云黄芩实施就地保护和迁地保护对策,对现存野外生境设置保护点,开展长期的动态监测;建立缙云黄芩的繁殖基地,实现复壮和野外回归,有效扩大其野生居群的范围和数量。此外,应深入开展缙云黄芩的化感自毒作用研究,明确化感物质造成缙云黄芩产生化感自毒作用的过程,分析化感物质影响缙云黄芩个体生长与居群扩张的作用机制,进而针对性地提出保护对策。
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