目的基因CXCL-1慢病毒表达系统的构建及在人正常肝细胞中的功能研究

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目的研究发现趋化因子CXCL1及其受体能够促进多种细胞的增殖。但是目前趋化因子及其受体与肝脏疾病发生发展间的关系报道甚少,因此,本研究拟通过构建目的基因CXCL-1慢病毒表达系统,以探讨趋化因子CXCL1与正常肝细胞的相关性,并为与肝癌细胞相关性的进一步研究奠定基础。方法构建CXCL-1慢病毒表达系统,筛选出携带GFP荧光标记并过度表达CXCL-1的的正常肝细胞。扩大培养后应用蛋白免疫印迹方法检测细胞是否表达靶基因。在此基础上,通过细胞单克隆形成实验、MTT比色法、流式细胞技术检测细胞周期来研究CXCL-1对正常肝细胞体外生长增殖能力的影响;利用Transwell小板实验检测目的基因CXCL-1对正常肝细胞迁移能力的影响。探讨CXCL-1对正常肝细胞生物学功能的影响。实验所得的数据用SPSS19.0软件包进行数据分析,用重复测量单因素方差分析对比转染前后细胞正常肝细胞株细胞功能试验(包括MTT比色法实验、细胞单克隆形成实验、流式细胞技术检测、Transwell迁移实验)是否具有显著性差异,P小于0.05为有统计学意义。结果1)成功构建目的基因CXCL-1慢病毒表达系统,病毒滴度检测结果为2.00E+8TU/ml;2)转染48h后经流式细胞仪检测,重组慢病毒表达质粒CXCL1-GV287/GFP-GV287、包膜质粒pHelper1.0、包装质粒pHelper2.0三质粒比例为4:3:2时转染率最高达95%左右;3)CXCL-1/7702组克隆形成数量及克隆形成率显著高于其余两对照组(非参数秩和检验得出P<0.05);4)MTT比色法结果显示:CXCL-1/7702组分别与空载组及空白对照组相比较,生长速度明显较快(区组方差分析得出P<0.05);5)Transwell实验显示:正常肝细胞系7702无迁移能力,CXCL-1对正常肝细胞系7702迁移能力没有影响。结论趋化因子CXCL-1对正常肝细胞具有明显的促细胞生长功能,但无促进正常肝细胞迁移的功能。
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