人噬菌体抗体库的构建及人源性bFGF抗体的筛选

被引量 : 0次 | 上传用户:kangcj66
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:采集含高效价碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体的自身免疫病患者外周血淋巴细胞,克隆人IgG重链Fd段和轻链K链基因片段,构建人噬菌体抗体库,并筛选抗bFGF噬菌体抗体克隆,获得高效价的bFGF抗体基因。 方法:收集系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)和皮肌炎(DM)等自身免疫病患者外周血,分离淋巴细胞,提取总RNA后逆转录获得cDNA第一链,通过PCR扩增抗体重链Fd段和轻链κ链基因片段,回收680bp左右的目的片段,将κ链基因片段经Sac Ⅰ/Xba Ⅰ双酶切后连接到噬菌粒载体pComb3中,将构建的重组噬菌粒载体pComb3-κ电转化大肠杆菌XL1-Blue菌构建成κ链文库。随后将重链Fd段经Spe Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切后连接到κ链质粒文库中,将构建的重组噬菌粒载体pComb3-κ-Fd电转化XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13超感染,构建人噬菌体抗体库。用bFGF包被酶标板,对抗体库进行3轮固相筛选,获得能结合bFGF的噬菌体抗体克隆,经phage-ELISA进一步鉴定及筛选,获得具有高亲和力的抗bFGF噬菌体抗体克隆。 结果:RT-PCR扩增获得了人IgG重链Fd段和轻链κ链基因片段,将κ链插入到pComb3噬菌粒中构建的人IgGκ链基因库(pComb3-κ)库容约为1.2×108;将人IgG重链Fd段克隆入pComb3-κ中构建人Fab抗体基因库,库容约为2.5×107;辅助噬菌体超感染后建立了人Fab噬菌体抗体库,滴度为4×1011pfu/mL,经过3轮“吸附—洗脱—扩增”的淘选富集,携带有抗bFGF特异性抗体的噬菌体得到了有效的富集;挑选26个克隆进行挽救,经phage-ELISA检测,结果显示获得4个具有高bFGF特异性和较高亲和力的Fab噬菌体抗体克隆。 结论:利用含高效价bFGF自身抗体的自身免疫患者淋巴细胞构建人Fab噬菌体抗体库,能有效地从中筛选出与bFGF特异结合的高亲和力的噬菌体抗体克隆,为bFGF抗体药物研究奠定基础。
其他文献
伴随的光通信的兴起,光传感以其独特的技术特点,在许多领域得到应用,解决了常规检测技术难以胜任的问题。特别是光纤光栅传感技术和利用光时域反射仪的分布式传感技术,发展十
对于常规单脉冲雷达而言,要区分落在同一距离单元、同一天线波束内的多个目标是非常困难的。一般提高角度分辨力的方法都会大大增加雷达的体积,重量和复杂度。针对此种情况,
在经济全球化的背景下,跨国生产经营已成为制造企业实现全球发展战略、增强竞争实力的重要途径。为了解决国际资源配置和整合,实现全球范围内的最优投资战略,跨国制造企业要
本文以民事诉讼中的调解与审判分离制度为研究对象,从对我国法院调解的制度现状和司法实践现状的对比入手,分析诉讼中调解与审判的关系,并由此提出调解与审判分离的必要性,进
针对人工检测亚麻纤维分裂度的诸多缺点,提出了采用图像分析法测定亚麻纤维分裂度的方法。该方法将亚麻纤维按照外观形态进行分类,不同的类别采取不同的方法进行测定;将纤维
<正>一直以来,初中语文教学被认为是以"教学生语文知识,提高学生语言运用能力"为教学目的的,但新一轮的课程改革认为初中语文教学应该担负起使学生传承民族文化的责任,因此,
随着我国经济的发展,我国很多工业方面也得到了显著的提高,公路桥梁工程是国家基础性建设中非常重要的部分,路桥工程的质量与人们的生活也是息息相关的,人们在经济水平提升的
评估典型水环境因子对金属毒性的影响对水质基准预测及修正具有重要意义。通过文献和数据库调研,收集了我国主要流域地表水硬度、DOC含量、pH等指标的测量数据。同时以斑马鱼
<正>"小金库"问题由来已久,表现多样,成因复杂,屡禁不绝,已成为滋生腐败的温床。长期以来,财政部门一直同"小金库"问题做斗争,致力于建立根治的长效机制。本文结合多年来在财
<正>湖南省委、省政府要求全省各级各部门将"小金库"治理工作纳入到教育实践活动中,今年5月在全省深入开展了党的群众路线教育活动,提出了严肃认真对"小金库"进行专项治理的