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目的:乳腺癌的发病率及死亡率逐年上升,女性面临着严重的健康威胁。随着医学对乳腺肿瘤的研究不断深入,及各学科不断的发展,目前对于乳腺癌有着规范及系统的治疗,即包含手术、化疗、放疗、内分泌治疗及HER2分子靶向治疗的综合治疗。而基因P53自1979年首次报道以来,一直是研究的热点,人们逐渐发现野生型P53有促进细胞凋亡、维持基因组稳定等功能,且半数以上的恶性肿瘤存在P53基因的突变。所以2003年上市了世界范围内首个基因治疗药物重组人P53腺病毒注射液(recombinant human Ad-P53,rAd-P53,又名今又生),其机制是将外源性P53以改构的5型腺病毒为载体进入增殖的肿瘤细胞内发挥其阻滞生长、促进凋亡、促进化疗及放疗疗效、抑制血管生长等作用。已被证实应用于头颈鳞癌有较好的疗效,对于乳腺癌的研究较少。本文通过研究rAd-P53与化疗药物联合应用对乳腺癌细胞株MCF-7的作用,探究两者是否有联合抗增殖、促凋亡作用,继而研究其相关基因表达变化,以了解其作用机制。此研究为rAd-P53与化疗药物联合应用治疗乳腺癌提供初步理论依据。方法:首先将rAd-P53和化疗药物阿霉素(adriamycin,ADM)、顺铂(cis-diamine dichloroplatinum,CDDP)联合作用于乳腺癌MCF-7细胞株96h后,采用水溶性四唑盐(WST)比色法在酶联免疫检测仪OD450nm处测量每孔的吸光值,通过Calcu Syn软件检测两者之间是否有协同作用,基于WST结果计算结合指数(combination index,CI)和单独成分影响(fractions affected,Fa),CI<1、CI=1、CI>1分别表达两者之间具有协同、相加、拮抗作用。选取具有协同作用的各药物浓度范围内一浓度,通过流式细胞仪检测细胞增殖的周期分布变化情况。应用实时荧光定量技术(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测rAd-P53和化疗药物单独及联合应用后相关促凋亡基因的变化。结果:1 rAd-P53联合化疗药物ADM及CDDP对乳腺癌细胞株MCF-7具有协同抗增殖作用。以空白对照组的存活率做为100%,各rAd-P53浓度(由低到高依次为3×102U/cell、1×103U/cell、3×103U/cell、1×104U/cell、3×104U/cell、1×105U/cell、3×105U/cell),ADM浓度(由低到高依次为0.003μM、0.01μM、0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM),CDDP浓度(由低到高依次为0.03μM、0.1μM、0.3μM、1μM、3μM、10μM)作用MCF-7细胞株96h后,用WST比色法检测不同药物浓度下细胞存活率及生长抑制率,绘制增殖曲线,经Calcu Syn软件分析,rAd-P53联合化疗药ADM时,Fa在0.2-0.6之间,CI<1,表明两者对乳腺癌细胞株MCF-7具有协同抗增殖作用;rAd-P53联合化疗药CDDP时,Fa在0.2-0.6之间,CI<1,表明两者对乳腺癌细胞株MCF-7也具有协同抗增殖作用。2 rAd-P53联合化疗药物ADM或CDDP诱导乳腺癌细胞株MCF-7发生细胞周期变化。以无处理组为空白对照组,分别以rAd-P53(1×104U/cell),ADM(0.2μM),CDDP(2μM)作用于乳腺癌细胞株MCF-7细胞96h后,收取、固定细胞,经流式细胞仪分析,三组单独用药组sub G1期均较对照组增高(分别为对照组0.17%,ADM组1.37%,CDDP组0.74%,rAd-P53组0.80%),差异具有统计学意义(P<0.05)。提示在单独用药的情况下,三种药物均具有诱导肿瘤细胞凋亡作用rAd-P53分别联合ADM或CDDP作用于乳腺癌细胞株MCF-7细胞,培养96h,收取、固定细胞,经流式细胞仪检测,联合用药各组sub G1期均较单独用药组增高(分别为ADM+rAd-P53联合用药组14.02%,CDDP+rAd-P53联合用药组10.31%),与对照组及单独用药各组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。3 rAd-P53联合化疗药物可调节乳腺癌细胞株MCF-7的P53、P21、P27、Bax、Noxa基因的表达水平。将MCF-7细胞分为6个组,分别为:对照组、rAd-P53组(1×104U/cell)、ADM组(0.2μM)、CDDP组(2μM)、rAd-P53+ADM联合用药组、rAd-P53+CDDP联合用药组,作用于乳腺癌细胞株MCF-7,培养96h,提取RNA反转录为c DNA,通过q RT-PCR检测基因P53、P21、P27、Bax、Noxa表达水平。结果显示:rAd-P53组及各个联合用药组P53基因表达水平均较对照组、ADM组及CDDP组增高(P<0.05)。各联合用药组与rAd-P53组相比基因P53表达量明显增高(P<0.05)。P21基因单独用药组相比对照组,表达均增高(P<0.05),各联合用药组均较单一用药组表达水平增高(P<0.05)。P27基因各单药组较对照组表达均增高(P<0.05),ADM+rAd-P53联合用药组、CDDP+rAd-P53联合用药组均较单独用药组表达水平增高(P<0.05)。Bax基因在CDDP+rAd-P53联合用药组、ADM+rAd-P53联合用药组中,表达水平均高于各单一用药组及对照组(P<0.05)。rAd-P53+ADM联合用药组Noxa表达水平均较对照组及ADM组高(P<0.05),CDDP+rAd-P53联合用药组Noxa表达水平均较对照组及CDDP组高(P<0.05)。结论:rAd-P53联合化疗药物ADM或CDDP对乳腺癌细胞株MCF-7具有协同抗增殖作用,其作用机理为诱导细胞周期中sub G1期增加并上调乳腺癌细胞中基因P53、P21、P27、Bax、Noxa的表达水平,rAd-P53可强化化疗药的诱导凋亡作用。