18F-FDG评价食管癌Eca109细胞放化疗疗效的体外实验研究

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第一部分18F-FDG评价5-FU对食管癌Eca109细胞生长抑制作用的体外实验研究目的:建立18F-FDG与食管癌Eca109细胞结合实验的方法学;探索18F-FDG细胞结合实验早期评价5-FU对食管癌Eca109细胞生长抑制作用的可行性。方法:以人食管鳞癌Eca109细胞为实验对象,依据预实验结果依次更改实验条件:(1)细胞浓度,(2)反应时间,(3)18F-FDG放射性活度,(4)葡萄糖浓度,进行18F-FDG细胞结合率测定;通过18F-FDG细胞结合试验及细胞增殖、细胞毒性检测试剂CCK-8测定5-FU对Eca109细胞生长抑制作用;应用透射电子显微镜观察细胞凋亡形态学变化;同时应用流式细胞技术检测5-FU对Eca109细胞凋亡及周期的影响。结果:(1)18F-FDG与食管癌Eca109细胞结合实验基本条件:细胞数量为1×106/瓶,18F-FDG放射性活度3.7KBq,反应时间100min,葡萄糖浓度0mol/L,细胞结合率为(40.63±0.76)%。(2)加入浓度125、250、500和1000μg/ml5-FU1mL作用24h后,18F-FDG细胞结合抑制率分别为(32.2±3.3)%、(43.15±2.33)%、(51.61±1.88)%、(71.97±2.09)%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。细胞结合抑制率随药物剂量增加而增加,两者呈正相关(r=0.97,P<0.01)。相同浓度5-FU作用24h后,CCK-8抑制率与细胞结合抑制率呈正相关(r=0.844,P<0.01)。以上浓度药物作用48h后,18F-FDG细胞结合抑制率分别为(68.14±0.85)%、(76.18±0.92)%、(79.36±0.83)%、(88.97±0.25)%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。细胞结合抑制率随药物剂量增加而增加,两者呈正相关(r=0.969,P<0.01)。相同浓度5-FU作用48h后,CCK-8抑制率与细胞结合抑制率呈正相关(r=0.831,P<0.01)。(3)透射电子显微镜可见典型细胞凋亡及坏死形态学变化。(4)流式细胞技术检测发现0、125、500、1000μg/mL5-FU作用Eca109细胞48h后,其凋亡率(早期凋亡和晚期凋亡之和)分别为(2.2±0.32)%、(8.6±0.39)%、(14.6±1.61)%、(29.7±2.27)%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。500、1000μg/mL5-FU作用48h后可检测到G0/G1前期的亚二倍体峰为“凋亡峰”。随着5-FU浓度增高,G0/G1期的细胞比例升高,G2/M期、S期细胞比例则明显降低(P<0.05)。结论:5-FU对食管癌Eca109细胞体外生长有抑制作用;18F-FDG细胞结合抑制率、CCK-8细胞生长抑制率、流式细胞技术检测细胞凋亡率,都可用于评价5-FU作用24h、48h后对食管癌Eca109细胞的生长抑制作用。第二部分18F-FDG评价放疗对食管癌Eca109细胞生长抑制作用的体外实验研究目的:探索18F-FDG细胞结合实验早期评价放疗对食管癌Eca109细胞生长抑制作用的可行性。方法:以人食管癌Eca109细胞为实验对象,通过18F-FDG细胞结合实验和细胞增殖、细胞毒性检测试剂CCK-8测定不同放射剂量(分别为2、4、6、8Gy)对Eca109细胞生长抑制作用;应用透射电子显微镜观察细胞凋亡形态学变化;同时应用流式细胞技术检测放疗对Eca109细胞凋亡及周期的影响。结果:(1)不同放射剂量(分别为2、4、6、8Gy)作用Eca109细胞24h后,18F-FDG细胞结合抑制率分别为(-6.16±2.92)%、(8.33±3.88)%、(15.73±2.71)%、(22.6±3.46)%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。细胞结合抑制率随放射剂量增加而增加,两者呈正相关(r=0.786,P<0.01)。以上放射剂量作用48h后,细胞结合抑制率分别为(31.04±3.29)%、(45.13±3.12)%、(51.47±1.36)%、(57.24±2.68)%,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。细胞结合抑制率随放射剂量增加而增加,两者呈正相关(r=0.964,P<0.01)。相同放射剂量作用48h后,CCK-8抑制率与细胞结合抑制率呈正相关(r=0.736,P<0.01)。(2)透射电子显微镜可见典型细胞凋亡及坏死形态学变化。(4)流式细胞技术检测发现0Gy,2Gy,4Gy,8Gy组放射线作用Eca109细胞48h后,其凋亡率(早期凋亡和晚期凋亡之和)分别为(2.5±0.39)%、(9.5±1.56)%、(16.8±2.39)%、(22.3±1.87)%。各组凋亡率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。8Gy组作用48h后可检测到G0/G1前期的亚二倍体峰为“凋亡峰”。随着放射剂量增加,G0/G1期和S期细胞比例降低,G2/M期比例则明显升高(P<0.05)。结论:放疗对食管癌Eca109细胞体外生长有抑制作用;18F-FDG细胞结合抑制率、CCK-8细胞生长抑制率、流式细胞技术检测细胞凋亡率,都可用于评价放疗作用24h、48h后对食管癌Eca109细胞的生长抑制作用。
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