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目的:探讨人肺癌细胞系PA(人高转移性巨细胞肺癌细胞株)、PG(人低转移性肺腺癌细胞)对重组基底膜侵袭作用及消瘤保肺丸对其侵袭及粘附能力的影响,为其广泛、深入地运用于临床提供部分实验依据,初步揭示化痰药物为主的复方中药作用的主要靶点,使运用中药抗肺癌转移的机理取得进展,从而为中医“痰”学说与粘附分子相关性的理论研究提供实验依据。 方法:8只健康日本大耳白兔,随机分为消瘤保肺丸高剂量药物组、低剂量药物组,清肺化痰丸对照组,空白组4组,每组2只,每组每天早晚各给药1次,每次10ml/kg,其中高、低剂量组分别相当于人等效剂量的10、5倍,空白组给以等量生理盐水,连续给药3日,末次给药后2h内分别从心脏无菌采血20ml,室温静置2h,待血凝坚实、血清析出后,1500rpm离心10min,取血清,56℃30min灭活,-20℃保存备用。药物血清剂量的确定:将含药血清加入无血清RPMI-1640培养液中稀释至终浓度为20％进行实验,以观察不同浓度药物的作用。采用Transwell小室法,在上室加入50μlMatrigel(约5μg),37℃孵育1h,将经各组药物血清预处理24h的肿瘤细胞消化,重悬于含1%BSA的无血清RPMI-1640培养液中,调整细胞浓度至2.0×106/ml,加100ul细胞悬液于Transwell小室上室,同时加入以RPMI-1640培养液配制的消瘤保肺丸含药血清,对照组为未经药物处理的肿瘤细胞,37℃5%CO2细胞培养箱孵育18h。取出滤膜,甲醇固定1min,HE染色。用棉签擦去未侵袭的滤膜表面细胞,用中性树胶封片。在400倍光学显微镜下随机选择5个视野,计每个视野细胞数,以侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力。 分别将2.0μg纤维粘连蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)、人工基底膜(Matrigel)铺于96孔板,室温干燥后,用含1%BSA的RPMI-1640培养液100μl4℃封闭过夜,PBS洗3次,以含0.1%BSA的无血清RPMI-1640培养液悬浮两种肿瘤细胞,每孔加入8×104个细胞,加药组同时加入以RPMI-1640培养液配制的各组含药血清,37℃5%CO2细胞培养箱孵育1.5h,PBS轻轻吹打,洗去未粘附的细胞,弃去残余PBS,每孔加入100ul无血清RPMI-1640培养液溶解的0.1mgMTT,于细胞培养箱中继续培养4h,去上清,加入150μlDMSO,室温振荡10min,充分混匀,酶标仪测定570nm处吸光值。 结果:消瘤保肺丸对重组基底膜侵袭的影响,对照组对肺癌PA、PG的抑制率分别为25.80%、19.88%,虽然与空白组比较差异显著(P<0.05),但抑制率小于30%,故认为无抗侵袭作用;消瘤保肺丸对肺癌PA、PG均有一定的抑制,抑制率均大于30%,与空白组及对照组比较差异显著(P<0.05),且消瘤保肺丸高剂量组与消瘤保肺丸低剂量组比较差异显著(P<0.05),故认为有抗侵袭作用;消瘤保肺丸对人肺癌PG、PA重组基底膜粘附的影响,消瘤保肺丸对人肺癌PG重组基底膜粘附作用的影响明显优于清肺化痰丸,且随消瘤保肺丸剂量增加对人肺癌PG重组基底膜粘附作用的影响明显增强(P<0.05),消瘤保肺丸高剂量组与清肺化痰丸对照组丸对人肺癌PA重组基底膜粘附的影响有显著性差异(P<0.05)。 结论:消瘤保肺丸高剂量组明显抑制人肺癌细胞系PG、PA对重组基底膜侵袭及粘附作用,为进一步研究其对人肺癌细胞侵袭转移过程粘附分子表达的影响提供依据,研究中药化痰类为主的药物对人肿瘤细胞侵袭转移过程粘附分子表达的影响及为今后防治肿瘤转移确定治疗方案、判断预后提供一定理论依据。