背景:以往研究表明蓝萼甲素能够抑制多种肿瘤细胞增殖,并可诱导细胞凋亡。然而有关蓝萼甲素诱导肿瘤细胞凋亡的详细分子机制至今仍未阐释清楚。目的:应用稳定同位素标记氨基酸细胞培养(stable isotope labeling by amino acid in cell culture,SILAC)定量蛋白质组学方法,探讨蓝萼甲素(Glaucocalyxin A)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的分子机制。方法:蓝萼甲素作用于A549细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化情况,蛋白免疫印迹法检测细胞凋亡标志蛋白---多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]剪切条带(Cleaved PARP)的表达变化;应用SILAC定量蛋白质组学技术分析蓝萼甲素诱导A549细胞凋亡后细胞内蛋白质表达水平的变化,蛋白免疫印迹法验证差异蛋白哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)的表达情况;蛋白免疫印迹法检测细胞自噬标志蛋白---微管相关蛋白1轻链3 II型蛋白(microtubule associated protein 1 light chain 3 II,LC3-II),蓝萼甲素联合应用3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)作用于A549细胞后,细胞计数试剂盒CCK-8检测细胞的存活率和蛋白免疫印迹法检测Cleaved PARP表达变化情况。结果:蓝萼甲素作用于人肺腺癌A549细胞后,流式细胞仪检测结果显示,细胞凋亡率从5%增加到18%;蛋白免疫印迹结果表明,Cleaved PARP蛋白表达量明显上调。定量蛋白质组学分析发现蓝萼甲素诱导细胞凋亡后有75个蛋白质表达水平上调,同时有59个蛋白质表达水平下调;我们从这134个差异表达蛋白中选择了m TOR蛋白进行表达水平验证,蛋白免疫印迹结果表示:蓝萼甲素细胞组m TOR蛋白表达水平明显下调,这与定量蛋白质组学分析结果是一致的;蓝萼甲素细胞组LC3-II蛋白表达显著上调;联合应用蓝萼甲素和自噬抑制剂3-MA后,结果表明,细胞存活率进一步下降,且Cleaved PARP表达水平进一步增加。结论:我们鉴定了134个蛋白在蓝萼甲素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡过程中表达水平发生了显著变化,并采用蛋白免疫印迹法证实了m TOR蛋白的表达水平显著下调,该结果与定量蛋白质组学检测数据是一致的;并据此线索通过实验研究发现蓝萼甲素诱导A549细胞凋亡的同时可激活自噬,这种自噬激活作用对细胞存活起着保护作用。