chi-miR-370-3p对内蒙古绒山羊毛囊形态发生调控作用的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nmjhurfdv
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microRNAs(miRNAs)是一类长度约为22nt的非编码RNA,它在多个生物学过程中对m RNA发挥转录后调控作用。绒山羊毛囊形态发生的标志性事件是上皮细胞、真皮成纤维细胞形成基板(Placode,PC)和真皮聚集(Dermal Condensate,DC),这期间涉及到多个信号分子动态调节,但这些关键信号分子诱导的相关细胞生物学机制尚未见报道。本研究对课题组前期构建的内蒙古绒山羊胎儿期皮肤组织miRNAs时序表达谱进行差异表达分析和生物信息学分析,筛选出与内蒙古绒山羊与PC、DC形成相关的关键miRNA及其靶基因,通过实时荧光定量(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和双荧光素酶报告系统对该miRNA及其靶基因的靶向关系进行鉴定,利用qRT-PCR和Western blot验证在上皮细胞、真皮成纤维细胞中该miRNA对其靶基因的调控作用,采用DNA染色法、CCK8法、Annexin V-FITC/PI双染色法、细胞划痕试验检测该miRNA对上皮细胞和真皮成纤维在细胞周期、增殖、凋亡、迁移等方面的影响。主要结果如下:1.chi-miR-370-3p是内蒙古绒山羊胎儿期毛囊形态发生阶段的关键miRNA;qRT-PCR、双荧光素酶报告系统结果显示TGF-βR2、FGFR2是chi-miR-370-3p的靶基因。2.qRT-PCR、Western blot结果显示,chi-miR-370-3p在上皮细胞和真皮成纤维细胞中对TGF-βR2、FGFR2在m RNA、蛋白水平上均有显著的负调控作用。3.DNA染色法、CCK8法结果显示chi-miR-370-3p可增加上皮细胞和真皮成纤维细胞在细胞周期中G0/G1的占比,抑制细胞增殖。Annexin V-FITC/PI双染色法结果显示,chi-miR-370-3p对上皮细胞和真皮成纤维细胞凋亡无显著变化。4.chi-miR-370-3p通过靶向调控TGF-βR2、FGFR2提高上皮细胞和真皮成纤维细胞的迁移能力。
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