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目的:MTX联合CTX能否阻断RORγt信号通道,进而调节Th17/Treg细胞平衡,抑制炎症反应。方法:选取雄性DBA1小鼠56只,随机分为正常对照组10只和CIA组46只。建立CIA模型后根据拟用药不同随机分为4组:CIA组、MTX组(1.5 mg/kg/3d)、CTX组(30 mg/kg/10d)和MTX+CTX组(联合组,MTX:1.5mg/kg/3d,CTX:30mg/kg/10d)加强免疫3周后开始给药,治疗过程中连续监测各组小鼠左踝关节肿胀度及关节炎指数(arthritis index,AI)。给药11周后处死小鼠,取双膝、左踝关节切片,进行HE染色,观察病理改变。分选脾细胞中的Na?ve T细胞,加入刺激剂于37℃5%CO2细胞培养箱中培养96小时,用FCM方法检测各组Th17和Treg细胞及其比值;用RT-PCR方法检测各组RORγt和Foxp3m RNA及其比值。结果:(1)经治疗11周后各治疗组关节肿胀、AI、关节病理表现较CIA组明显改善,有显著性差异;联合组关节肿胀度与CIA组相比差异有统计学意义(P<0.05),与CTX、MTX单用药组相比,差异尚无统计学意义。联合组关节AI评分与CIA组相比差异有统计学意义(P<0.05),与CTX、MTX单用药组相比,差异尚无统计学意义。(2)经给药11周后流式细胞术检测培养后小鼠脾脏Naive T细胞中Th17细胞所占比例,CIA组较正常对照组Th17细胞所占比例明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组较CIA组Th17细胞所占比例降低,差异有统计学意义(P<0.05);联合组较与CTX、MTX单用药组降低Th17细胞,差异尚无统计学意义(P<0.05)。(3)经给药11周后流式细胞术检测培养后小鼠脾脏Naive T细胞中Treg细胞所占比例,CIA组较正常对照组Treg细胞所占比例明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与CIA组相比Treg细胞降低,差异尚无统计学意义。(4)Th17/Treg可以发现CIA组较正常对照组Th17/Treg明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组较CIA组Th17/Treg显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);联合组与CTX、MTX单用药组相比Th17/Treg降低,差异尚无统计学意义(P<0.05)。(5)经治疗11周后RT-PCR检测小鼠分化后Th17细胞中RORγt m RNA的表达水平,CIA组较正常对照组RORγt m RNA所占比例明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组较CIA组RORγt m RNA所占比例降低,差异有统计学意义(P<0.05);联合组较与CTX、MTX单用药组降低RORγt m RNA,差异尚无统计学意义(P<0.05);经治疗11周后RT-PCR检测小鼠分化后Treg细胞中Foxp3m RNA的表达水平,CIA组较正常对照组Foxp3m RNA所占比例明显减低,差异有统计学意义(P<0.05);各治疗组与CIA组相比Foxp3m RNA降低,差异尚无统计学意义;通过对RORγt/Foxp3m RNA可以发现CIA组较正常对照组RORγt/Foxp3m RNA明显增高,差异有统计学意义(P<0.05);联合组较CIA组RORγt/Foxp3m RNA显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);CTX、MTX单用药组与CIA组相比RORγt/Foxp3m RNA降低,差异尚无统计学意义(P<0.05)。结论:证实MTX联合CTX较单用药能更有效地抑制RORγt信号转倒通道,从而控制免疫炎性细胞Th17增加,调节Th17/Treg细胞平衡。