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柘树Cudrania tricuspidata (Carr.) Bur.为桑科(Moraceae)柘属植物,其根入药,具有祛风除湿、活血通经、健脾益胃等功效,临床多用于治疗风湿关节痛、跌打损伤、脾虚泄泻及黄疸等症,又可用于治疗胃癌等消化系统肿瘤。八十年代初,上海中药二厂将柘树根的提取液制成糖浆剂(柘木糖浆),用于治疗消化道恶性肿瘤,虽有一定疗效,但该制剂存在活性成分不明确,剂型老化,生产工艺缺乏科学性,没有定性、定量的质量控制标准等问题,从而影响其疗效的提高。在前期工作中,课题组研制的柘树提取物具有显著的抗肿瘤活性,并在联合化疗药增效方面,效果显著,同时对柘树抗肿瘤活性成分的研究显示柘树(?)酮乙、macluraxanthone B和柘树(?)酮丁等异戊烯基(?)酮是柘树的抗肿瘤活性成分。目前,关于异戊烯基(?)酮化合物体内、体外药理活性方面的研究较多,但其药代动力学以及吸收机理方面的研究却很少。本文进行了柘树中具有抗肿瘤活性的异戊烯基(?)酮化合物的药代动力学研究,并初步探讨了这类化合物的口服吸收机理,为柘树的进一步开发和利用提供了理论依据。1.柘树抗肿瘤活性成分的提取与纯化经过反复柱层析及半制备HPLC,分离纯化得到5个异戊烯基(?)酮化合物：柘树(?)酮乙(cudratricusxanthone B, CXB,1)、柘树(?)酮丁(cudratricusxanthone D,2), macluraxanthone B (3),柘树(?)酮N (cudratricusxanthone N, CXN,4)和柘树(?)酮O(cudratricusxanthone O,5),其中化合物4和5为新化合物。经HPLC-ELSD测定,化合物1-5及柘树咕吨酮辛(6)的纯度依次为：98.39%,98.17%,96.57%,98.48%,96.90%和98.71%,达到含量测定用或鉴别用对照品的要求。体外细胞毒活性测定结果显示,化合物4对多种肿瘤细胞的生长具有明显抑制活性。2.柘树抗肿瘤活性成分在大鼠体内的药代动力学研究选取柘树中抗肿瘤活性较好、含量较高的异戊烯基(?)酮CXB和CXN进行大鼠体内的药代动力学研究。(1)CXB在大鼠体内的药动学研究首次建立了大鼠血浆样品中CXB的HPLC-ESI-MS/MS测定方法,并研究了大鼠静注CXB后的药动学特征。血浆样品的预处理采用甲基叔丁基醚萃取法。采用Venusil XBP-PH C18色谱柱分离,以甲酸：甲醇(0.5：99.5,v：v)为流动相,通过电喷雾离子化三重四级杆串联质谱,以正离子方式和多反应离子监测(MRM)模式进行检测,监测离子对为m／z 397.1／285.0(CXB)和m／z 381.6／269.2(内标柘树咕吨酮辛)。CXB在1.0-500.0 ng／mL的浓度范围内浓度与峰面积比值有良好的线性关系,定量限(S／N≥10)为1.0 ng／mL。批间、批内测定的RSD小于7.92%,准确度在100%±15%之间。该方法准确、灵敏,符合生物样品分析方法的要求,可用于血浆样品中CXB的检测。药动学结果表明,SD大鼠尾静脉注射CXB(5.0 mg／kg)后,血药浓度—时间曲线符合三室模型,CXB在体内分布较快(t1／2 pi为0.11 h,t1／2α为0.50 h)而消除较慢(t1／2β为8.2 h),AUC0-t为566.0±76.4 ng h／mL(1)CXN在大鼠体内的药动学研究首次建立了大鼠血浆样品中CXN的HPLC-ESI-MS/MS测定方法,并研究了大鼠静注和口服CXN后的药动学特征。血浆样品的预处理采用甲基叔丁基醚萃取法。在HPLC-ESI-MS/MS法中,用于定量分析的离子对为m／z 395.0／339.1(CXN)和m／z 381.6／269.2(内标柘树咕吨酮辛),其余条件同CXB的测定方法。CXN在1.0-500.0 ng／mL的浓度范围内浓度与峰面积比值有良好的线性关系,定量限(S／N≥10)为1.0 ng／mL。批间、批内测定的RSD小于9.85%,准确度均在100%±15%之间。该方法准确、灵敏,符合生物样品分析方法的要求,可用于血浆样品中CXN的检测。药动学结果表明,SD大鼠尾静脉注射CXN(2.0 mg／kg)后,血药浓度—时间曲线符合三室模型,CXN在体内分布快(t1／2 pi为0.04 h,t1／2α为0.25 h),消除较慢(t1／2β为9.2 h),AUCo-t为354.6±106.7 ng h／mL。SD大鼠灌胃给药CXN(40 mg／kg)后,血药浓度—时间曲线难以用经典的房室模型拟合,表观消除相半衰期t1／2为17.1 h,绝对生物利用度为5.92%。3.CXN在Caco-2细胞模型中吸收机理的初步研究采用Caco-2细胞模型初步研究了柘树抗肿瘤活性成分CXN的吸收机理,分别考察时间、基质pH、温度、浓度及P-糖蛋白抑制剂对Caco-2细胞摄取CXN的影响。采用HPLC-UV法对细胞样品中CXN的含量进行测定。结果表明,CXN的细胞摄取量在6.25-50μg／mL浓度范围内存在线性关系,CXN的细胞摄取以被动扩散方式为主,细胞对CXN的摄取量在pH7.0的条件下最大,细胞对CXN的摄取量随温度的上升而增加。P-gp抑制剂维拉帕米对CXN的细胞摄取无明显影响,另一种P-糖蛋白抑制剂环孢菌素A在高浓度CXN的条件下却降低了CXN的细胞摄取。