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背景及目的：结直肠癌是一种高发病率和高死亡率的癌症，2000年WHO统计显示，男性和女性结直肠癌的发病率为9.4%和10.0%，其中年龄是一个重要的危险因素，平均为67岁。在中国，结直肠癌的发病率仅次于胃癌、食道癌，并随着生活水平的提高及饮食结构的改变，其发病率有逐年增高的趋势。目前，结肠癌的治疗方法主要有手术、放化疗及中医药治疗，而常见化疗药物有5-氟尿嘧啶、丝裂霉素和环磷酰胺等，传统的化疗药物吸收利用率低且易出现大的毒副作用，人类正迫切要找到一种新的治疗方法。现有研究显示，肿瘤细胞存在死亡受体DRs（Deathreceptors），而TNF超家族成员肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL（TNF related apoptosis inducing ligand）则可通过结合受体DR4（Deathreceptor4）及DR5（Deathreceptor5）诱导肿瘤细胞凋亡【1】。在本次实验中，我们通过构建抗人DR5单链抗体（aDR5ScFv），探讨其是否能诱导结肠癌SW480细胞凋亡及其凋亡的可能机制,为今后研究特异性抗肿瘤治疗方法或研制免疫导向药物奠定基础。方法：1、本实验室构建重组质粒pEt22b+aDR5ScFv，转入大肠杆菌E.coliB12，后经IPTG诱导表达抗人DR5单链抗体（aDR5ScFv），再用凝胶电泳法分析aDR5ScFv的纯度。2、在一定浓度的aDR5ScFv作用下，采用流式细胞仪检测结肠癌sw480细胞表面DR受体的表达情况。3、将aDR5ScFv稀释成7个浓度，分别作用于鼠结肠癌sw480细胞4h和12h，采用MTT法观察aDR5ScFv抗体对结肠癌sw480细胞的毒性效应。4、将2个不同浓度的aDR5ScFv分别作用于结肠癌sw480细胞12h后，收集细胞，加入凋亡检测试剂，用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。5、运用Hoechst33342对细胞进行染色，在荧光显微镜下观察细胞凋亡形态变化。6、在aDR5ScFv抗体作用于鼠结肠癌sw480细胞后，收集细胞总蛋白，运用Westernblotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果：1、实验组中结肠癌sw480细胞表面的DR5表达率为89.21%。2、MTT法检测结果显示，浓度为0.00219、0.004375、0.00875、0.0175、0.035、0.07、0.14mg/ml的aDR5ScFv分别作用于结肠癌sw480细胞4h和12h后的细胞抑制率（%）为18.3±1.3、22.1±1.5、32.4±1.3、34.2±1.2、38±1.1、45.2±1.0、60.3±1.3和27.1±0.4、32.6±1.8、35.4±1.6、40.7±1.13、54.3±0.42、75±1.51、89±1.85，随着抗体浓度的增加和作用时间的延长，细胞抑制率明显上升。3、流式细胞仪结果显示，浓度为0.004375mg/ml和0.035mg/ml的aDR5ScFv作用于结肠癌sw480细胞12h后，其细胞凋亡率分别为21.87%和42.3%。4、荧光显微镜观察显示，相对于对照组（细胞形态呈圆形，无核固缩，无细胞凋亡）而言，实验组（aDR5ScFv作用于结肠癌sw480细胞后）细胞在200倍视野下可见中晚期凋亡，在400倍视野下中晚期凋亡细胞中，可见核固缩碎裂。5、Westernblotting检测结果显示，相对于对照组而言，实验组中促进细胞凋亡的相关蛋白active-caspase3、pro-caspase3、8、bid、jun、均表达上调。同时，抑制细胞凋亡的相关蛋白erk、akt、xiap表达下调，而tipe则上调。结论：1、结肠癌sw480细胞的DR表达率高，非常适合用于研究新型抗肿瘤药物。2、抗人DR5单链抗体（aDR5ScFv）明显促进结肠癌sw480细胞的凋亡，是寻找抗肿瘤治疗的一个重要方面。3、抗人DR5单链抗体（aDR5ScFv）促进结肠癌sw480细胞凋亡可能与caspases、bid、erk等相关调控因子通路密切相关。