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化学合成的寡核苷酸及其衍生物在聚合酶链式反应（PCR）、生物芯片、基因诊断、分子结构分析及疾病治疗等领域有着广泛的应用，随着生物技术不断地发展和日益广泛的应用，寡核苷酸的需求量也在快速增长，必将拥有更为广泛的应用领域和广阔的市场空间。黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）是我国重要的对外检疫性有害生物，为烟草花叶病毒属（Tobamovirus）成员，主要侵染葫芦科植物，可导致严重减产甚至绝产。以前我国无此病毒分布，近几年国內从进口种子的葫芦科植物上发现该病毒，它造成了数以千亩计的西瓜等作物绝产和出口退货等重大经济损失。建立该病毒的快速、准确、灵敏的检测和监控技术，是防止该病毒传入国内及扩散流行的关键环节，意义重大。本论文是在前人工作的基础上并结合自己探索性的实验，建立了两种Taqman探针及引物的合成和纯化技术条件，并利用自行合成的Taqman探针及引物在国内首次采用PCR检测方法，从南瓜果实中检测发现CGMMV，建立了南瓜果实中CGMMV的反转录PCR（RT-PCR）和实时荧光PCR（RTF-PCR）检测方法。主要工作如下：采用固相合成方法，使用DNA合成仪自动合成了一对检测CGMMV的引物，采用OPC、PAGE、反相HPLC等不同的纯化方法，对引物的纯化进行了系统地研究，比较其优缺点，建立了引物纯化的实用技术体系。本文应用自行合成的引物，对来自甘肃的疑似染病的南瓜样品进行RT-PCR扩增，成功地得到了阳性扩增片段，经测序和分析，结果表明：扩增片段的大小为660 bp，包含CGMMV的外壳蛋白基因和3′非编码区，与已发表的CGMMV分离物进行核酸序列比对，核苷酸序列同源性为98—99％，在中国首次证明南瓜果实中存在CGMMV。其测序结果同时表明：本实验合成和纯化的引物序列完整、准确，PCR扩增效率高。本文应用DNA自动荧光标示技术，使用DNA合成仪，合成出FAM／TAMRA、FAM／BHQ2标记的Taqman探针和一对特异性引物，产物采用反相液相色谱法分别纯化，并应用于CGMMV的RTF-PCR检测，首次建立了南瓜果实中CGMMV的RTF-PCR检测方法。多次实验结果证明，自行合成的Taqman探针检测性能良好，其中FAM／BHQ2探针没有荧光本底，与FAM／TAMRA探针相比，其RTF-PCR检测灵敏度更高。RTF-PCR是目前世界上最快速、灵敏、准确的分子检测技术，引物、探针的纯度和正确性，直接影响检测的准确性和灵敏度。实验结果进一步证明了我们建立的探针合成、纯化体系的高效率和高准确性，为RTF-PCR性能的高效发挥打下了基础。