论文部分内容阅读
目的：探讨LY294002对与骨髓基质HS-5细胞共培养后的人急性髓系白血病（AML）细胞对As2O3敏感性的增强作用。方法：1.建立人AML细胞株（NB4细胞、HL60细胞与U937细胞）与骨髓基质HS-5细胞共培养体系以模拟体内造血微环境中的AML细胞，采用CD45+免疫磁珠分选粘附于HS-5细胞表面生长的AML细胞；2.采用MTT法及台盼蓝拒染法检测AML细胞对药物的敏感性；3.Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞术检测AML细胞的凋亡率；4.流式细胞术检测AML细胞的周期时相分布；5.Western blot方法检测AML细胞内蛋白p-AktSer473、p-AktThr308、p-PDK1与p-PTEN表达水平。结果：As2O3可明显抑制单独悬浮培养的AML细胞的生长。随着剂量的增大和作用时间的延长，As2O3对AML细胞的生长抑制作用越趋明显。3株AML细胞中NB4细胞对As2O3的敏感性最高。与HS-5细胞共培养后，NB4细胞、HL60细胞与U937细胞对As2O3的敏感性明显减低，增殖抑制率分别为（15.86±3.01）%VS（62.92±2.74）%、（14.96±1.40）%VS（48.54±4.54）%、（19.19±2.39）%VS（52.53±2.99）%。与As2O3单独作用相比，经LY294002与As2O3联合处理后，与HS-5细胞共培养后的NB4细胞、HL60细胞与U937细胞的增殖抑制率明显提高，分别为（33.95±4.35）%VS（15.86±3.01）%、（34.77±2.07）%VS（14.96±1.40）%、（38.09±2.24）%VS（19.19±2.39）%。与单独悬浮培养的细胞相比，与HS-5细胞共培养后的NB4细胞、HL60细胞与U937细胞对As2O3所诱导的凋亡强度均明显减弱，共培养后的凋亡率分别为（13.60±0.85）%VS（23.44±2.37）%、（9.84±1.99）%VS（17.97±1.58）%、（7.28±1.78）%VS（17.76±2.13）%。与单独悬浮培养的细胞相比，与HS-5细胞共培养1d后，NB4细胞、HL60细胞与U937细胞中G0/G1期的细胞比例明显增加，分别为（52.53±2.39）%VS（32.47±2.8）%、（47.02±3.42）%VS（30.31±2.07）%、（63.02±2.46）%VS（41.46±2.58）%；S期细胞比例明显减少，分别为（36.87±3.28）%VS（60.35±4.88）%、（45.45±4.33）%VS（62.33±2.27）%、（28.53±2.44）%VS（51.56±3.69）%。LY294002单独作用2-12h，可明显抑制AML细胞内PI3K/Akt信号通路：正调控蛋白p-AktSer473、p-AktThr308与p-PDK1明显下调，负调控蛋白p-PTEN上调；且随着LY294002作用时间的延长，对信号通路的抑制越明显。与HS-5细胞共培养后，AML细胞内PI3K/Akt信号通路被激活：蛋白p-AktSer473、p-AktThr308与p-PDK1明显上调，蛋白p-PTEN明显下调；而经LY294002处理后，可明显抑制已被激活的PI3K/Akt通路。与LY294002单独作用相比，LY294002联合As2O3处理后，共培养后的AML细胞内蛋白p-AktSer473进一步下调。结论：联合PI3K/Akt信号通路特异性阻断剂LY294002可明显提高与HS-5细胞共培养后的AML细胞对As2O3的敏感性；且二者联合可协同杀伤AML细胞。