【摘 要】
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沙门氏菌属于肠杆科细菌,为革兰氏阴性病原菌,是食品中常见的四大食源性致病菌之一,通过研究快速的检测方法,以提高检测沙门氏菌检测时间,对沙门氏菌的检测提供快速、高效、
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沙门氏菌属于肠杆科细菌,为革兰氏阴性病原菌,是食品中常见的四大食源性致病菌之一,通过研究快速的检测方法,以提高检测沙门氏菌检测时间,对沙门氏菌的检测提供快速、高效、方便的方法。本研究通过将沙门氏菌单抗与羧基化纳米磁珠偶联制备免疫磁珠,并以此为NMR分子探针,以免疫磁珠为生物传感器,特异性地捕获并检测出样品中的致病菌。建立了一种全新的基于纳米探针的NMR食源性致病菌的快速检测方法,并对新方法的工艺参数进行了优化,对新方法的有效性进行了评估。主要研究结果如下所示:1、沙门氏菌特异性免疫磁珠的制备、表征及捕获效率的优化。2、沙门氏菌与免疫磁珠偶联反应的最佳环境的优化(缓冲液、偶联时间、免疫磁珠使用量、捕获容器等)。3、最优条件与溶液T2值的曲线关系优化。4、分别采用180°-τ-90°脉冲序列和CPMG序列运用核磁共振仪进行弛豫时间测定。实验中,将得到的不同样品溶液放入核磁共振仪中检测T2值,并与空白样品进行对照考察不同条件对T2值的影响。通过实验发现,免疫磁珠的使用量、缓冲溶液的选择、捕获时间的长短,以及捕获容器的种类都会对样品T2值的大小产生影响。通过优化实验,分别绘制出不同条件下T2值的曲线变化,并得出最佳捕获条件。在捕获缓冲溶液为PBS(0.01mol/L,pH7.4),免疫磁珠使用量为50ug,捕获容器为聚丙烯离心管,混匀捕获时间为1.5h的条件下,核磁共振仪测得的样品T2值曲线最佳。通过微生物培养对照确认,该方法检测样品菌浓度的线性范围为104-108CFU/mL。本研究为沙门氏菌的检测提供了新的方法和途径,缩短了检测时间和工序,并且为低场核磁共振技术研究应用开辟了广阔的空间。
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