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研究目的:为了探索狂犬病毒单克隆抗体表达条件,为后续深入研究制备稳定、高效价和质量优良的抗体提供经验,同时建立胶体金试剂盒用于检测狂犬病毒,为狂犬病毒提供一种简便、快速和灵敏度高的检测方法,因此本文对抗狂犬病毒单克隆抗体的制备以及胶体金试剂盒进行了初步的研究。本文以杂交瘤细胞为研究对象,对杂交瘤细胞体外培养条件、抗狂犬病毒单克隆抗体的制备、抗狂犬病毒杂交瘤细胞纯化筛选的制备、生物反应器培养条件和胶体金试剂盒的建立进行了研究。结果:1、静置培养条件下,用显微镜观察杂交瘤细胞贴壁生长,表面光滑透亮,圆润,倾向于聚集生长,生长速度快;细胞经过低血清驯化培养后在2%、5%和10%血清浓度中生长情况差异不大,在无血清条件下仍不能正常生长;细胞起始培养密度在2.5×10~5个/mL时能正常生长,低于1×10~5个/mL时不能正常生长;细胞能在1640培养基和DF12培养基中生长,不能在DMEM和F12培养基中生长;细胞株分泌抗体不稳定,出现退化。2、通过体内诱生法得到两株细胞株注射的小鼠腹水呈阳性,抗体效价为1:1600;PCR检测69和102细胞株发现存在支原体污染。3、通过单克隆筛选得到B6、D10、G6和C9四株目的杂交瘤细胞株;生物反应器培养杂交瘤细胞实验失败,细胞在生物反应器中无法生长。4、制备的胶体金呈红色,稳定,经过测试无凝集沉淀现象;预实验表明蛋白能标记胶体金;单克隆抗体与胶体金反应的最小浓度为稀释200倍的浓度;ELISA优化反应结果为当以69小鼠抗体包被时,腹水稀释倍数为1:100,抗原稀释倍数为1:100,102抗体稀释倍数为1:100测得的OD值最高,为0.733。当以102小鼠腹抗体包被时,腹水稀释倍数为1:100,抗原稀释倍数为1:100和1:1000,69小鼠抗体稀释倍数为1:10和1:100时测得的OD值最高,分别为0.792和0.784;胶体金试纸条经过组装、质控线和检测线的划线后滴加样品,阳性样品在质控线和检测线都出现了红色沉淀线,阴性样品只在检测线出现了沉淀线,在质控线中无反应。结论:通过对狂犬病毒单克隆抗体的研究以及金标试剂盒的建立,初步得到了杂交瘤细胞体外培养的条件;通过体内诱生法成功制备了狂犬病毒单克隆抗体,得到了四株目的杂交瘤细胞;初步建立了用于检测狂犬病毒的金标试剂盒。在实验中出现了细胞分泌抗体不稳定,细胞株出现支原体污染等现象,影响了单克隆抗体的制备,在后续的实验中需要进行反思和改进。