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由于耐药基因的水平或垂直传播给临床药物治疗带来了巨大麻烦,细菌的耐药性已成为目前畜牧业发展与医学实践中面临的最棘手问题。特别是自然界中广泛存在的革兰氏阴性菌,不但是院内感染的主要病原菌,还被发现是各种耐药基因的贮存库。随着抗菌药物的大量使用,越来越多的革兰氏阴性菌呈现多重耐药甚至广泛耐药状态,能有效治疗革兰氏阴性菌感染的药物越来越少。因具有良好的抗菌活性及临床使用安全性,替加环素被认为是对抗多药耐药革兰氏阴性菌的“最后一道防线”。然而,近年来肺炎克雷伯氏菌和大肠杆菌逐渐出现了替加环素耐药,因此,定期监测肺炎克雷伯氏菌和大肠杆菌对替加环素的敏感性,深入探索其耐药的主要机制,对动物和人类健康均具有重要意义。本研究首先将临床分离的203株肺炎克雷伯氏菌和251株大肠杆菌进行替加环素耐药表型的筛选,再利用PCR扩增,电转化试验、功能性分析试验、药敏试验、全基因组测序等技术手段,对肺炎克雷伯氏菌和大肠杆菌中替加环素的耐药机制进行探讨。结果显示,有1株人源肺炎克雷伯氏菌和1株动物源大肠杆菌对替加环素耐药,将替加环素耐药肺炎克雷伯氏菌进行电转化试验获得了一个含单一质粒的替加环素耐药电转子。功能性分析试验发现该电转子中tet(A)基因发生了双移码突变。药敏试验证实,该基因突变体可单独导致替加环素的MIC值增加8倍,米诺环素和四环素增加128倍;全质粒测序及环状中间体检测显示,该tet(A)基因突变体位于一个类似Tn1721的转座子上,且能成功环化。动物源替加环素耐药大肠杆菌存在着相同位点的双移码突变,电转化试验、药敏试验及全基因组测序证实,该tet(A)基因突变体由质粒介导。这些数据说明tet(A)突变体可降低肺炎克雷伯氏菌和大肠杆菌对替加环素的敏感性,并借助转座子或质粒在细菌之间进行水平传播,以加速替加环素耐药革兰氏阴性菌在临床中的流行。综上所述,tet(A)基因突变体是导致革兰氏阴性菌对替加环素耐药的重要机制,扩宽了对革兰氏阴性菌对替加环素耐药机制的认识。tet(A)基因突变体可由转座子或质粒介导,从分子水平上解释了替加环素耐药革兰氏阴性菌菌株在兽医和医学临床上快速出现的原因,并为tet(A)基因突变体在革兰氏阴性菌中的传播控制提供了依据。